Күзәнәк туры RT qPCR комплекты - SYBR яшел I туры күзәнәк лизис күзәнәкләре әзер Бер адым qRT-PCR комплектлары
Тасвирламалар
Бу комплект уникаль лизис буфер системасын куллана, ул РТ-qPCR реакцияләре өчен культуралы күзәнәк үрнәкләреннән тиз арада РНКны чыгара ала, шуның белән күп вакыт һәм күп РНК чистарту процессын бетерә.РНК шаблонын 7 минутта гына алырга мөмкин.5×Туры RT Микс һәм 2×Комплект белән тәэмин ителгән туры qPCR Mix-SYBR реагентлары тиз һәм нәтиҗәле санлы PCR нәтиҗәләрен ала ала.
5×Туры RT Микс һәм 2×Туры qPCR Mix-SYBR көчле ингибитор толерантлыгына ия, һәм үрнәкләрнең лизаты турыдан-туры RT-qPCR шаблоны буларак кулланылырга мөмкин.Бу комплектта уникаль РНК югары якынлыклы Foregene кире транскриптаз, һәм Hot D-Taq DNA полимерасы, dNTPs, MgCl бар.2, реакция буферы, PCR оптимизаторы һәм стабилизатор.
Характеристикалар
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Комплект компонентлары
| I өлеш | Буфер КЛ |
| Foregene Protease Plus II | |
| Буфер СТ | |
| II өлеш | ДНК Эразер |
| 5 × Туры Микс | |
| 2 × туры qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX белешмә буяу | |
| RNase-ddH2O | |
| Инструкция | |
Featuresзенчәлекләр һәм өстенлекләр
■Гади һәм эффектив: Cell Direct RT технологиясе ярдәмендә РНК үрнәкләрен 7 минут эчендә алырга мөмкин.
Demand ampleрнәк сорау кечкенә, чөнки 10 күзәнәк сынап карарга мөмкин.
■ putгары үткәрү: ул 384, 96, 24, 12, 6 кое тәлинкәләрдә культуралы күзәнәкләрдә РНКны тиз таба ала.
■ ДНК Эразеры чыгарылган геномнарны тиз арада бетерә ала, алдагы эксперимент нәтиҗәләренә йогынтысын киметә ала.
RT Оптимальләштерелгән RT һәм qPCR системасы ике этаплы RT-PCR кире транскрипцияне эффективрак һәм PCR конкретрак итә, һәм RT-qPCR реакция ингибиторларына чыдамрак итә.
Комплект кушымтасы
Куллану күләме: культуралы күзәнәкләр.
- Лизис үрнәге белән чыгарылган РНК: бу комплектның RT-qPCR шаблонына гына кагыла.
- Комплектны түбәндәге максатларда кулланырга мөмкин: ген экспрессиясен анализлау, siRNA-арадашлы ген сүндерү эффектын тикшерү, наркотиклар тикшерү һ.б.
Диаграмма
Саклау һәм саклану вакыты
Бу комплектның I өлеше 4 at сакланырга тиеш;II өлеш -20 at сакланырга тиеш.
Foregene Protease Plus II 4тә сакланырга тиеш℃, -20 at туңмагыз.
Реагент 2×Туры qPCR Mix-SYBR -20 сакланырга тиеш℃караңгыда;еш кулланылса, аны 4 тә сакларга мөмкинShort кыска вакытлы саклау өчен (10 көн эчендә кулланыгыз).
Real Time PCR праймериз принциплары
Алга пример һәм кире пример
Real Time PCR өчен праймериз дизайны бик мөһим.Праймерлар PCR көчәйтүнең үзенчәлеге һәм эффективлыгы белән бәйле, һәм түбәндәге принципларга таянып эшләнергә мөмкин:
Праймер озынлыгы: 18-30bp.
GC эчтәлеге: 40-60%.
Tm кыйммәте: Праймер 5 кебек праймериз дизайн программалары, праймерның Tm кыйммәтен бирә ала.Агымдагы һәм агымдагы праймерларның Tm кыйммәтләре мөмкин кадәр якын булырга тиеш.Tm исәпләү формуласын да кулланырга мөмкин: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR эшләгәндә, 5 ° C примердан түбән температура, гадәттә, аннальинг температурасы итеп сайлана (анналь температураның тиешле артуы PCR реакциясенең үзенчәлеген арттырырга мөмкин).
Праймерлар һәм PCR продуктлары:
Дизайн праймериз PCR көчәйтү продуктының озынлыгы яхшырак 100-150bp.
Шаблонның икенчел структур өлкәсендә дизайн праймериз мөмкин кадәр сакланырга тиеш.
Агымдагы һәм аскы агымның 3 ′ очлары арасында 2 яки күбрәк тулыландыргыч нигезләр формалашудан сакланыгыз.
Пример 3 ′ терминал базасы 3 өстәмә G яки C белән була алмый.
Праймерларның үзләре тулыландыручы структураларга ия була алмыйлар, югыйсә PCR көчәйтүенә тәэсир итеп, чәч структурасы барлыкка киләчәк.
ATCG праймер эзлеклелегендә мөмкин кадәр тигез таратылырга тиеш, һәм 3 ′ терминал базасы Т кебек сакланырга тиеш.
Кушымта 1 ： Күзәнәк туры RT-qPCR комплект компоненты өстәмә пакеты
1.Күзәнәк лизисы чишелеше
|
| |||
| Комплект компонентлары (24 кое лизис системасы / кое) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т. | 500 Т. | ||
| PartлешМин | Буфер КЛ | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 μл | 1 мл × 2 | |
| Буфер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| PartлешII | ДНК Эразер | 400 μл | 1 мл × 2 |
2.РТ Микс
|
| |
| Комплект компонентлары (20 μл реакция системасы) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т. | |
| 5 × Туры Микс | 800 μл |
| RNase-ddH2O | 1,7 мл × 2 |
|
| ||
| Комплект компонентлары (20 μл реакция системасы) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 Т. | 1000 Т. | |
| 2 × туры qPCR Mix-SYBR | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 50 × ROX белешмә буяу | 40 μл | 200 μл |
| RNase-ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Күрсәтмә кулланмалар:
