(96-кое) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR комплекты - SYBR Green I.
Тасвирламалар
.Әр сүзнең(96-кое) QuickEasyTM Күзәнәк туры RT-qPCR комплекты-SYBR Green I.тәэмин итәуникаль лизис буфер системасыto тиз РНК чыгаркультуралы күзәнәктәнRT-qPCR реакцияләре өчен үрнәкләр, күп вакыт таләп итә һәм күпРНКны чистарту процессы, кирәкле РНК шаблонын алу өчен 7 минут вакыт кирәк..Әр сүзнең5 × Туры Миксһәм2 × туры qPCR Mix-SYBRтартмада бирелгән тиз һәмреаль вакыт санын эффектив алуPCR нәтиҗәләре.
5 × Туры РТ Микс һәм 2 × Туры qPCR Микс-SYBR ингибиторның толерантлыгына ия, һәм эффектив кире транскрипция һәм конкрет көчәйтү шаблоны буларак сынау өчен үрнәк лизатын куллана ала.Реагентта РНК өчен якын булган Foregene уникаль Кире Транскриптаз, шулай ук Hot D- Taq DNA Полимерасы, dNTPs, MgCl бар.2 , реакция буферы, PCR оптимизаторы һәм стабилизаторы, һәм лизис буферы белән берлектә үрнәкне тиз, җиңел һәм төгәл табу өчен кулланырга мөмкин, һәм ул югары сизгерлек, көчле үзенчәлек һәм яхшы тотрыклылык үзенчәлекләренә ия.
Комплект 96 культуралы күзәнәкләрнең микро-системалы лизисына юнәлтелгән, яхшы бердәмлек һәм эзлеклелеккә ия;комплект компонентлары 96 лизис реакциясен, 96 кире транскрипция реакциясен һәм 96 × 2 qPCR реакциясен тәэмин итә, алар 96 кое күзәнәк тәлинкәсен бер тапкыр куллану өчен, реагентларның кат-кат ачылуы, туңдырылуы һәм эрүе һәм реагент эшенең бозылуы аркасында килеп чыккан пычранудан саклый.
Комплект компонентлары
| Комплект композициясе ( 50 μL лизис системасы / 20 μЛRT реакция системасы / 20μL qPCR реакция системасы) | DRT-03011 | Искәрмә | |
| 96Т | |||
| PartлешI | БуферCL | 5 мл | КүзәнәкЛизис |
| ФоргенПротеаз Плюс II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| Partлеш II | ДНКСүндергеч | 100 μL | |
| 5 × Туры Микс | 400 μL | RT | |
| 2 × Туры qPCR Микс-SYBR | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX белешмә буяу | 400µL | ||
| RNase- БушлайddH2 O | 1.7мл |
| |
| Mануаль | 1 кисәк | 1 хезмәт | |
*: Лизис реагенты ДНК Эразер комплектның II өлешенә кертелгән;Кәрәзле Лизис, ТР һәм qPCR компонентларын аерым сатып алырга мөмкин.
Featuresзенчәлекләр һәм өстенлекләр
■Гади һәм эффектив: Cell Direct RT технологиясе ярдәмендә РНК үрнәкләрен 7 минут эчендә алырга мөмкин.
Demand ampleрнәк сорау кечкенә, чөнки 10 күзәнәк сынап карарга мөмкин.
■ putгары үткәрү: ул 384, 96, 24, 12, 6 кое тәлинкәләрдә культуралы күзәнәкләрдә РНКны тиз таба ала.
■ ДНК Эразеры чыгарылган геномнарны тиз арада бетерә ала, алдагы эксперимент нәтиҗәләренә йогынтысын киметә ала.
RT Оптимальләштерелгән RT һәм qPCR системасы ике этаплы RT-PCR кире транскрипцияне эффективрак һәм PCR конкретрак итә, һәм RT-qPCR реакция ингибиторларына чыдамрак итә.
Комплект кушымтасы
Куллану күләме: культуралы күзәнәкләр.
- Лизис үрнәге белән чыгарылган РНК: бу комплектның RT-qPCR шаблонына гына кагыла.
- Комплектны түбәндәге максатларда кулланырга мөмкин: ген экспрессиясен анализлау, siRNA-арадашлы ген сүндерү эффектын тикшерү, наркотиклар тикшерү һ.б.
Саклау һәм саклану вакыты
Бу комплектның I өлеше 4тә сакланырга тиеш℃;II өлеш -20 at сакланырга тиеш.
Foregene Protease Plus II 4тә сакланырга тиеш℃, -20 at туңмагыз.
Реагент 2×Туры qPCR Микс-Такман -20 сакланырга тиеш℃караңгыда;еш кулланылса, аны 4 тә сакларга мөмкинShort кыска вакытлы саклау өчен (10 көн эчендә кулланыгыз).
Real Time PCR праймериз принциплары
Алга пример һәм кире пример
Real Time PCR өчен праймериз дизайны бик мөһим.Праймерлар PCR көчәйтүнең үзенчәлеге һәм эффективлыгы белән бәйле, һәм түбәндәге принципларга таянып эшләнергә мөмкин:
- Праймер озынлыгы: 18-30bp.
- GC эчтәлеге: 40-60%.
- Tm кыйммәте: Праймер 5 кебек праймериз дизайн программалары, праймерның Tm кыйммәтен бирә ала.Агымдагы һәм агымдагы праймерларның Tm кыйммәтләре мөмкин кадәр якын булырга тиеш.Tm исәпләү формуласын да кулланырга мөмкин: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR эшләгәндә, 5 ° C примердан түбән температура, гадәттә, аннальинг температурасы итеп сайлана (анналь температураның тиешле артуы PCR реакциясенең үзенчәлеген арттырырга мөмкин).
- Праймерлар һәм PCR продуктлары:
- Дизайн праймериз PCR көчәйтү продуктының озынлыгы яхшырак 100-150bp.
- Шаблонның икенчел структур өлкәсендә дизайн праймериз мөмкин кадәр сакланырга тиеш.
- Агымдагы һәм аскы агымның 3 ′ очлары арасында 2 яки күбрәк тулыландыргыч нигезләр формалашудан сакланыгыз.
- Пример 3 ′ терминал базасы 3 өстәмә G яки C белән була алмый.
- Праймерларның үзләре тулыландыручы структураларга ия була алмыйлар, югыйсә PCR көчәйтүенә тәэсир итеп, чәч структурасы барлыкка киләчәк.
- ATCG праймер эзлеклелегендә мөмкин кадәр тигез таратылырга тиеш, һәм 3 ′ терминал базасы Т кебек сакланырга тиеш.
Кушымта1 ： С.ell DirectRT-qPCR Комплектt өстәмә пакет
1. Лизис чишелешен чакырыгыз
| Күзәнәк лизисы чишелеше | |||
| Комплект компонентлары (24 кое лизис системасы / кое) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Т. | 500 Т. | ||
| PartлешМин | Буфер КЛ | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 μл | 1 мл × 2 | |
| Буфер СТ | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| PartлешII | ДНК Эразер | 400 μл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Комплект компонентлары (20 μл реакция системасы) | DRT-01011-B1 |
| 200 Т. | |
| 5 × Туры Микс | 800 μл |
| RNase-ddH2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Микс | ||
| Комплект компонентлары (20 μл реакция системасы) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Т. | 1000 Т. | |
| 2 × Туры qPCR Микс-Такман | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20 × ROX сылтама буяу | 40 μл | 200 μл |
| RNase-ddH2O | 1,7 мл | 10 мл |
Күрсәтмә кулланмалар:
