Төп молекуляр биология терминнарын аңлату
1. cDNA һәм cccDNA: cDNA - mRNAдан кире транскриптаз белән синтезланган ике катлы ДНК;cccDNA - хромосомадан азат булган ике юллы ябык түгәрәк ДНК.
2. Стандарт катлау берәмлеге: protein-геликс һәм β-протеин протеинның икенчел структурасы берәмлеге төрле тоташтыручы полипептидлар аша махсус геометрик аранжировкалар белән структур блоклар ясый ала.Билгеләнгән катлауның бу төре гадәттә супер икенчел структура дип атала.Барлык өченче структураларны диярлек бу катлау төрләре, хәтта аларның берләштерелгән төрләре белән дә сурәтләргә мөмкин, шуңа күрә алар стандарт катлау берәмлекләре дип тә аталалар.
3. CAP: цикллы аденозин монофосфат (CAMP) рецептор белок CRP (CAMP рецепторы протеины), CAMP һәм CRP кушылуыннан соң барлыкка килгән комплекс CAP активлаштыручы белок дип атала (CAMP активлаштырылган белок)
4. Палиндромик эзлеклелек: ДНК фрагментының кире тулыландыргыч эзлеклелеге, еш кына чикләү ферментлары сайты.
5. micRNA: mRNA эзлеклелеген тулыландыручы һәм mRNA тәрҗемәсен тыя ала торган өстәмә комачаулаган РНК яки антисенс РНК.
6. Рибозим: РНКның бүленү процессында автокаталитик роль уйный торган катализатор активлыгы булган РНК.
7. Мотив: Аксым молекулаларының киңлек структурасында охшаш өч үлчәмле формага һәм топологиягә ия кайбер җирле төбәкләр бар
8. Сигнал пептиды: белок синтезы вакытында N-терминусында 15-36 аминокислота калдыклары булган пептид, ул протеинның трансмембранасына юл күрсәтә.
9. Аттенуатор: оператор өлкәсе һәм транскрипцияне туктатучы структур ген арасында нуклеотид эзлеклелеге.
10. Тылсымлы тап: Бактерияләр үсә һәм аминокислоталарның тулысынча җитмәве белән, бактерияләр барлык геннарның чагылышын туктатыр өчен ашыгыч ярдәм күрсәтәчәк.Бу гадәттән тыш хәлне тудыручы сигналлар - гуанозин тетрафосфат (ppGpp) һәм гуанозин пентафосфат (pppGpp).PpGpp һәм pppGpp роле бер яки берничә оперон гына түгел, ә аларның күпчелегенә тәэсир итә, шуңа күрә алар супер-регулятор яки тылсымлы урыннар дип атала.
11. Агымдагы промоутер элементы: промоутер эшчәнлегендә көйләүче роль уйный торган ДНК эзлеклелеген аңлата, мәсәлән, -10 төбәгендәге TATA, -35 өлкәсендә TGACA, көчәйткечләр, аттенаторлар.
12. ДНК тикшерүе: билгеле эзлеклелектә һәм билгеле максатлы геннарны ачыклау өчен киң кулланылган ДНКның билгеле эзлеклелеге.
13. SD эзлеклелеге: тәрҗемәне көйли торган рибосома һәм mRNAның эзлекле эзлеклелеге.
14. Моноклональ антитела: бер антигеник детерминантка каршы эш итүче антитела.
15. Космид: Бу ясалма рәвештә ясалган экзоген ДНК векторы, ул COS өлкәләрен этапның ике очында да саклый һәм плазмидка тоташкан.
16. Зәңгәр-ак ноктаны тикшерү: LacZ гены (кодлау β-галактозида), фермент хромоген субстратын X-гал (5-бромо-4-хлоро-3-индол-β-Д-галактозид) тарата ала, шулай итеп зәңгәр төс ясый.Экзоген ДНК кертелгәч, LacZ генын белдереп булмый, һәм рекомбинант бактерияләрен тикшерү өчен, штамм ак.Бу зәңгәр-ак скринка дип атала.
17. Cis-актер элементы: Ген экспрессиясен көйләүче ДНКдагы нигезләрнең билгеле эзлеклелеге.
18. Кленов ферменты: I ДНК полимеразының зур фрагменты, 5 '3' экзонуклаз активлыгы ДНК полимераз I холоензимнан чыгарылганнан кала.
19. Анкорлы PCR: кызыклы ДНКны бер очында билгеле эзлеклелектә көчәйтү өчен кулланыла.Поли-dG койрыгы билгесез эзлеклелекнең бер очына өстәлде, аннары поли-дК һәм билгеле эзлеклелек PCR көчәйтү өчен праймер буларак кулланылды.
20. Берләштерелгән протеин: эукариотик белок гены экзоген ген белән бәйләнгән, һәм оригиналь ген протеины һәм экзоген протеин тәрҗемәсеннән торган протеин бер үк вакытта күрсәтелә.
Башка молекуляр биология терминнары
1. ДНКның физик картасы - ДНК молекуласының фрагментларын урнаштыру тәртибе.
2. RNase ярылуы ике төргә (автокатализ) һәм (гетерокатализ) бүленә.
3. Прокариотларда өч инициатив фактор бар (IF-1), (IF-2) һәм (IF-3).
4. Трансмембрана белгечләре җитәкчелек таләп итә (сигнал пептидлары), һәм протеин шапероннары роле (пептид чылбырын протеинның туган конформациясенә кертергә ярдәм итә).
5. Промоутер элементларын гадәттә ике төргә бүлеп була: (төп промоутер элементлары) һәм (агымдагы промоутер элементлары).
6. Молекуляр биологиянең тикшеренү эчтәлеге нигездә өч өлешне үз эченә ала: (структур молекуляр биология), (ген экспрессиясе һәм көйләү), һәм (ДНК рекомбинация технологиясе).
7. ДНКның генетик материал булуын күрсәтүче ике төп эксперимент (тычканнарның пневмококк инфекциясе) һәм (Эчеричия коли T2 этап инфекциясе).потенциал).
8. HnRNA белән mRNA арасында ике төп аерма бар: (hnRNA mRNAга әверелү процессында бүленә), (mRNAның 5 'очын m7pGppp капкасы белән кушыла, һәм mRNA кислотасының (полиА) койрыгының 3' очында өстәмә полиадениляция бар).
9. Белгечнең күп субунит формасының өстенлекләре (субунит - ДНКны куллануның экономик ысулы), (белок синтезындагы очраклы хаталарның протеин эшчәнлегенә тәэсирен киметергә мөмкин), (активлык бик эффектив һәм тиз ачылырга һәм ябылырга мөмкин).
10. Протеинны катлау механизмының төп эчтәлеге беренче нуклеяция теориясенә (нуклеяция), (структур баету), (соңгы үзгәртеп кору) керә.
11. Галактоза бактерияләргә икеләтә тәэсир итә;бер яктан (күзәнәк үсеше өчен углерод чыганагы буларак кулланырга мөмкин);икенче яктан (ул шулай ук күзәнәк стенасының компоненты).Шуңа күрә, CAMP-CRP-бәйсез промоутер S2 фон дәрәҗәсендә даими синтез өчен кирәк;шул ук вакытта югары дәрәҗәдәге синтезны көйләү өчен CAMP-CRP бәйләнешле промоутер S1 кирәк.Транскрипция (S2) G белән (S1) G белән башлана.
12. Рекомбинант ДНК технологиясе шулай ук (ген клонлау) яки (молекуляр клонлау) буларак та билгеле.Төп максат - (бер организмдагы генетик мәгълүматны ДНКны башка организмга күчерү).Типик ДНК рекомбинациясе эксперименты гадәттә түбәндәге адымнарны үз эченә ала: (1) Донор организмының максатлы генын (яки экзоген генын) чыгарып, яңа рекомбинант ДНК молекуласын формалаштыру өчен аны башка ДНК молекуласына (клонлау векторы) энзиматик рәвештә тоташтырыгыз.Rec Рекомбинант ДНК молекуласы алучы күзәнәккә күчерелә һәм алучы күзәнәкендә кабатлана.Бу процесс трансформация дип атала.The Рекомбинант ДНКны үзләштергән алучы күзәнәкләрне тикшерегез.The Чит ил ярдәме генының күрсәтелүен ачыклау өчен рекомбинант ДНК булган күзәнәкләрне күп күләмдә эшкәртегез.
13. Плазмидның ике төре бар: төп күзәнәк протеин синтезы белән катгый контрольдә тотылганнар (каты плазмидлар), һәм төп күзәнәк протеин синтезы белән катгый контрольдә тотылмаганнар (плазмидлар) дип атала.
14. PCR реакция системасында түбәндәге шартлар булырга тиеш: а.Аерылырга тиешле максатлы генның ике юлының һәр очында тулыландырылган эзлеклелектә ДНК праймерлары (якынча 20 нигез).б.Rылылык тотрыклылыгы булган ферментлар: TagDNA полимерасы.в, dNTPd, шаблон буларак ДНК эзлеклелеге
15. PCR-ның төп реакция процессы өч этапны үз эченә ала: (денатурация), (аннальинг), һәм (киңәйтү).
16. Трансгеник хайваннарның төп процессы гадәттә үз эченә ала: - Клонланган чит генны ашлама йомыркасы яисә эмбрион тамыр клеткасы ягына кертү;TheСезләнгән йомырка яки эмбрион тамыр клеткасын хатын-кыз жатына күчерү;Em Тәмам эмбрион үсеше һәм үсеше чит геннар белән токым өчен;New Яңа гомозигоз сызыклар үрчетү өчен чит протеиннар җитештерә алган бу хайваннарны нәсел запасы итеп кулланыгыз.
17.үсә.
18. Тикшеренүләрнең тирәнәюе белән, беренче буын антителалар (поликлональ антителалар), икенче буын (моноклональ антителалар), өченче буын (генетик инженерия антителалары) дип атала.
19. Хәзерге вакытта бөҗәк вирусларының генетик инженериясе, нигездә, бакуловируска юнәлтелгән, ул (экзоген токсин ген) кертүдә күрсәтелә;(бөҗәкләрнең гадәти тормыш циклын бозучы геннар);(вирус геннарын модификацияләү).
20. Имезүчеләрнең РНК полимераз II промоутерында TATA, GC, CAATның гомуми элементларына туры килгән транс-актуаль факторлар (TFIID), (SP-1) һәм (CTF / NF1).
егерме бер.РНК полимеразының төп транскрипция факторлары: TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, һәм аларның бәйләү эзлеклелеге: (D, A, B, E).Анда TFII-D функциясе (TATA тартмасына бәйләнешле).
егерме ике.ДНК белән бәйләнгән транскрипция факторларының күбесе үлчәм формасында эшли.ДНК белән бәйләнгән транскрипция факторларының функциональ доменнары гадәттә түбәндәгеләр (геликс-борылыш-геликс), (цинк бармак мотивы), (төп-лейцин) фермер мотивы).
егерме өч.Эндонуклазның өч төрле чикләү режимы бар: (симметрия күчәренең 5 'ягында 5' ябыштыргыч оч чыгару өчен), (симметрия күчәренең 3 'ягында 3' ябыштыргыч оч ясау өчен (симметрия күчәрендә яссы сегментлар ясау).
егерме дүрт.Плазмид ДНКның өч төрле конфигурациясе бар: (SC конфигурациясе), (oc конфигурациясе), (L конфигурациясе).Электрофорезда беренчесе (SC конфигурациясе).
25. Экзоген ген белдерү системалары, нигездә (Escherichia coli), (Чүпрә), (Бөҗәк) һәм (Имезүчеләрнең күзәнәк өстәле).
26. Трансгеник хайваннар өчен еш кулланыла торган ысуллар: (ретровирус инфекциясе ысулы), (ДНК микроинжекция ысулы), (эмбрион тамыр клеткасы ысулы).
Молекуляр биология куллану
1. 5 дән артык РНК функцияләрен әйтегез?
РНК tRNA күчерү Аминокислота Рибосома РНК РРНА Рибосома хәбәрче РНК mRNA протеин синтезы шаблонын тәшкил итә Гетероген атом RNA hnRNA җитлеккән mRNA кечкенә атом RNA snRNA прекурсоры hnRNA бүленешендә катнашкан Кечкенә цитоплазмик RNA scRNA / 7SL-RNA белок РНА РНА РНА РНА РНА
2. Прокариотик һәм эукариотик промоутерлар арасында төп аерма нинди?
Прокариотик ТТГАКА --- ТАТААТ ------ Инициатива сайты-35 -10 Эукариотик көчәйткеч --- GC --- CAAT ---- TATAA-5mGpp-инициатива сайты-110 -70 -25
3. Табигый плазмидларның ясалма төзелешенең төп аспектлары нинди?
Табигый плазмидларның еш җитешсезлекләре бар, шуңа күрә алар генетик инженерия йөртүчесе буларак куллану өчен яраксыз, һәм алар үзгәртелергә һәм төзелергә тиеш: а.Сайлау өчен куллану җиңел булган, гадәттә антибиотик геннар кебек, ике яки аннан да күбрәк сайлау маркеры геннарын өстәгез.б.Рекомбинацияне җиңеләйтү өчен тиешле фермент кисү урыннарын арттыру яки киметү.в.Озынлыкны кыскартыгыз, кирәксез фрагментларны кисегез, импорт нәтиҗәлелеген күтәрегез һәм йөкләү сыйфатын арттырыгыз.г.Репликонны үзгәртегез, катыдан бушка, аз күчермәдән күбрәк күчермәгә.д.Генетик инженериянең махсус таләпләренә туры китереп махсус генетик элементлар өстәгез
4. Тән тукымасына хас CDNA дифференциаль тикшерү ысулына мисал китерегез?
Ике күзәнәк популяциясе әзерләнә, максатлы ген күзәнәкләрнең берсендә күрсәтелә яки югары дәрәҗәдә күрсәтелә, һәм максатлы ген бүтән күзәнәктә күрсәтелми яки түбән дәрәҗәдә күрсәтелми, аннары максатлы ген гибридизация һәм чагыштыру ярдәмендә табыла.Мәсәлән, шешләр барлыкка килү һәм үсеш вакытында шеш күзәнәкләре mRNA-ны гадәти күзәнәкләргә караганда төрле дәрәҗәгә китерәчәкләр.Шуңа күрә, шеш белән бәйле геннар дифференциаль гибридизация ярдәмендә тикшерелергә мөмкин.Индукция ысулы шулай ук экспрессияләнгән геннарны тикшерү өчен кулланылырга мөмкин.
5. Гибридома күзәнәк линияләрен ясау һәм тикшерү?
Какырык В күзәнәкләре + миелома күзәнәкләре, күзәнәк кушылуны көчәйтү өчен полиэтилен гликол (PEG) кушыгыз, һәм HAT уртачасында үскән спленик В-миелома кушылу күзәнәкләре (гипоксантин, аминоптерин, Т) туклануны киңәйтүне дәвам итәләр.Күзәнәк кушылуы үз эченә ала: флот-флот кушылу күзәнәкләре: үсә алмый, флот күзәнәкләрен витрода үстереп булмый.Сөяк-сөяк кушылу күзәнәкләре: гипоксантин куллана алмый, ләкин фолат редуктивы ярдәмендә пуринны икенче юл аша синтезлый ала.Аминоптерин фолат редуктивны тыя һәм шулай итеп үсә алмый.Сөяк-флот кушылу күзәнәкләре: HATда үсә ала, флот күзәнәкләре гипоксантин куллана ала, һәм сөяк күзәнәкләре күзәнәк бүленеше функциясен тәэмин итә.
6. Дидокси терминалны туктату ысулы (Сангер ысулы) белән ДНКның төп структурасын билгеләү принцибы һәм ысулы нинди?
Принцип - нуклеотид чылбыр терминаторын куллану - 2 ,, 3, -Дидоксинуклеотид ДНКны киңәйтү өчен.Анда 3/5 / фосфодиестер бәйләнешен формалаштыру өчен кирәк булган 3-OH булмаганлыктан, ДНК чылбырына кертелгәннән соң, ДНК чылбырын тагын да киңәйтеп булмый.Төп парлаштыру принцибы буенча, ДНК полимеразы гадәти киңәйтелгән ДНК чылбырында катнашу өчен dNMP кирәк булганда, ике мөмкинлек бар, берсе ddNTP катнашу, бу дезоксинуклеотид чылбырын киңәйтүгә китерә;икенчесе - dNTP катнашу, ДНК чылбыры киләсе ddNTP кушылганчы дәвам итә алсын өчен.Бу ысул буенча, ddNTP белән тәмамланган төрле озынлыктагы ДНК фрагментларын алырга мөмкин.Метод - ddAMP, ddGMP, ddCMP, һәм ddTMP дүрт төркемгә бүленү.Реакциядән соң полиакриламид гели электрофорезы йөзү полосалары буенча ДНК эзлеклелеген укый ала.
7. Активатор протеинының (CAP) транскрипциягә уңай көйләү эффекты нинди?
Cиклик аденилат (CAMP) рецептор белок CRP (CAMP рецептор протеины), CAMP һәм CRP кушылуы аркасында барлыкка килгән комплекс CAP (CAMPactivated protein) дип атала.Э.Коли глюкоза булмаган уртада үскәч, CAP синтезы арта, һәм CAP лактоза (Lac) кебек промоутерларны активлаштыру функциясенә ия.Кайбер CRP бәйләнешле промоутерларда гадәти -35 регион эзлеклелеге (TTGACA) җитми.Шуңа күрә, РНК полимеразына аны бәйләү кыен.CAP (функция) булуы: фермент һәм промоутерның бәйләүче тотрыклылыгын сизелерлек яхшырта ала.Бу, нигездә, түбәндәге ике аспектны күрсәтә: AP CAP фермент молекуласына промоутерның конформациясен һәм фермент белән үзара бәйләнешне үзгәртеп дөрес юнәлеш бирергә ярдәм итә, шулай итеп -10 өлкәсе белән берләшеп, -35 өлкәсе функциясен алыштыру ролен уйный.APCAP шулай ук РНК полимеразының ДНКдагы башка сайтларга бәйләнешен тыя ала, шуның белән аның промоутеры белән бәйләнеш мөмкинлеген арттыра ала.
8. Гадәттәге ДНК рекомбинация экспериментына нинди адымнар кертелә?
а.Донор организмының максатлы генын (яки экзоген генын) чыгарыгыз, һәм яңа рекомбинант ДНК молекуласын формалаштыру өчен аны башка ДНК молекуласына (клонлау векторы) тоташтырыгыз.б.Рекомбинант ДНК молекуласын алучы күзәнәккә күчерегез һәм аны күчерүчедә саклагыз.Бу процесс трансформация дип атала.в.Рекомбинант ДНКны үзләштергән алучы күзәнәкләрне экранга куегыз.г.Масса-күләм культура рекомбинант ДНК булган күзәнәкләр, чит ил ярдәме генының күрсәтелүен ачыклау өчен.
9. Ген китапханәсе төзү Рекомбинантларны тикшерүнең өч ысулы бирелгән һәм процесс кыскача сурәтләнгән.
Антибиотик каршылык скринкасы, каршылыкның инсерциональ инактивациясе, зәңгәр-ак тапны карау яки PCR скринкасы, дифференциаль скринка, ДНК тикшерүе Клонлау векторларының күбесе антибиотик каршылык геннарын йөртә (анти-ампициллин, тетрациклин).Плазмид Эшеричия колига күчерелгәндә, бактерияләр каршылыкка ирешәчәк, һәм күчерелмәгәннәрдә каршылык булмаячак.Ләкин ул үзгәртелгәнме, юкмы икәнен аера алмый.Ике каршылыклы ген булган векторда, әгәр бер генга чит ДНК фрагменты кертелсә һәм ген активсыз калса, уңай рекомбинантлар өчен экранда төрле препаратлар булган ике тәлинкә контроле кулланылырга мөмкин.Мәсәлән, pUC плазмидында LacZ гены бар (кодлау β-галактозида), ул хромоген субстрат X-галны (5-бромо-4-хлоро-3-индол-β-Д-галактозид) тарата ала, шулай итеп зәңгәр төскә керә.Чит ил ДНКлары кертелгәч, LacZ генын белдереп булмый, һәм рекомбинант бактерияләрен тикшерү өчен, штамм ак.
10. Трансгеник хайваннарны эмбрион тамыр күзәнәкләре аша алуның төп процессын аңлатыгыз?
Эмбрион тамыр клеткалары (ES) - эмбрион үсеше вакытында эмбрион күзәнәкләре, алар ясалма культуралы һәм таралырга мөмкин һәм бүтән күзәнәкләргә дифференциацияләү функциясенә ия.ES күзәнәкләре культурасы: Бластосистның эчке күзәнәк массасы изоляцияләнгән һәм культуралы.ES ашаткычсыз катламда культуралы булганда, ул мускул күзәнәкләре һәм N күзәнәкләре кебек төрле функциональ күзәнәкләргә аерылачак.Фибробластлар булган уртада культуралы булганда, ES дифференциация функциясен саклап калачак.ES генетик яктан эшкәртелергә мөмкин, һәм аның дифференциацияләү функциясе дифференциацияләү функциясенә тәэсир итмичә интеграцияләнергә мөмкин, бу очраклы интеграция проблемасын чишә.Эмбрионик тамыр күзәнәкләренә экзоген геннар кертегез, аннары йөкле хатын-кыз тычканнарының жатына урнаштырыгыз, көчекләр булып үсегез һәм гомозигозлы тычканнар алу өчен крест.
