Проблемаларны анализлау өчен кулланмалар

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Бер РНК да чыгарып булмый, яисә нуклеин кислотасы аз

Гадәттә торгызу эффективлыгына тәэсир итүче бик күп факторлар бар, мәсәлән: РНК үрнәге, эш ысулы, элитация күләме һ.б.

Гомуми сәбәпләрне анализлау ：

1. Эш вакытында ванна яки түбән температурада (4 ° C) центрифугация.

Тәкъдим: Бүлмә температурасы (15-25 ° C), беркайчан да боз мунчасы һәм түбән температура центрифугасы.

2. Начар үрнәк саклау яки үрнәк саклау бик озак.

Тәкъдим: үрнәкләрне -80 ° C саклагыз яки сыек азотта туңдырыгыз, кат-кат туңдырудан сакланыгыз.РНК алу өчен яңа җыелган үрнәкләрне кулланырга тырышыгыз.

3. Лизис үрнәге җитми

Реклама: Зинһар, үрнәк һәм эш эремәсе (Сызыклы Акриламид) яхшылап кушылган һәм бүлмә температурасында 10 минутка инкубацияләнгәнен тикшерегез (15-25 ° C)

4.Элуент дөрес булмаган өстәлде

Реклама: Чистарту баганасы мембранасы уртасына RNase-Free ddH2O кушылганлыгына инаныгыз.

5.Бафер viRW2дагы сусыз этанолның дөрес булмаган күләме

Тәкъдим: Зинһар, күрсәтмәләрне үтәгез, Буфер viRW2-ка дөрес күләмле сусыз этанол кушыгыз һәм комплектны кулланганчы яхшылап кушыгыз。

6. Начар үрнәк куллану.

Тәкъдим: Буфер viRL 500μл өчен 200µл үрнәк.Артык үрнәк күләме РНК алу тизлеген киметәчәк.

7. Дөрес булмаган элитация күләме яки тулы булмаган элитация.

Тәкъдим: чистарту баганасының зур күләме 30-50μл;элитация эффекты канәгатьләнерлек булмаса, алдан җылытылган RNase-Free ddH өстәргә киңәш ителә₂O һәм бүлмә температурасында урнаштыру вакытын 5-10мин

8.Пурификация баганасында Буфер viRW2 чайкаганнан соң этанол калдыклары бар.

Тәкъдим: Әгәр этанол Буфер viRW2 чайкаганнан соң һәм 2 минутка буш торбалы центрифугациядән кала икән, чистарту баганасы бүлмә температурасында 5 минутка буш торба центрифугациясеннән соң калган этанолны тулысынча бетерү өчен калырга мөмкин.

Чистартылган РНК молекулаларының деградациясе

Чистартылган РНКның сыйфаты үрнәк саклау, RNase пычрануы, эшләве кебек факторлар белән бәйле.

Гомуми сәбәпләрне анализлау ：

1. collectedыелган үрнәкләр вакытында сакланмады.

Тәкъдим: Әгәр үрнәк җыюдан соң кулланылмаса, аны тиз арада -80 at яки сыек азотта саклагыз.РНК молекулаларын чыгару өчен, мөмкин булган вакытта яңа җыелган үрнәкләрне кулланырга тырышыгыз.

2. Collыелган үрнәкләр кат-кат туңдырылды һәм эрелде.

Тәкъдим: үрнәк җыю һәм саклау вакытында кат-кат туңдырудан һәм эрүдән сакланыгыз (югыйсә, нуклеин кислотасы җитештерүчәнлеге кимиячәк).

3.RNase операция бүлмәсендә кертелде яки бер тапкыр кулланыла торган перчаткалар, битлекләр һ.б.

Тәкъдим: РНК молекулаларын эксперимент алу иң яхшы РНК операция бүлмәсендә башкарыла, һәм эксперимент таблицасы эксперимент алдыннан чистартыла.Эксперимент вакытында бер тапкыр кулланыла торган перчаткалар һәм битлекләр киегез, RNase кертү аркасында килеп чыккан РНК деградациясен булдырмагыз.

4. Реагент куллану вакытында RNase белән пычранган.

Тәкъдим: бәйләнешле экспериментлар өчен яңа Вируслы РНК изоляциясе комплекты белән алыштырыгыз.

5.Сентрифуга торбаларының RNase белән пычрануы, пипетта киңәшләре һ.б.

Чистартылган РНК молекулалары агымдагы экспериментларга тәэсир иттеләр

Чистарту баганасы белән чистартылган РНК молекулалары тоз ионнары яки протеиннар күп булса, агымдагы экспериментларга тәэсир итәчәк, мәсәлән: кире транскрипция, Төньяк блот һ.б.

1.РНК молекулаларында тоз ионнары калган.

Реклама: Буфер viRW2-ка дөрес сусыз этанол кушылганлыгына инаныгыз, һәм чистарту колоннасын эш күрсәтмәләрендә дөрес центрифугация тизлеге буенча ике тапкыр юыгыз salt Әгәр дә тоз ионнары калган булса, сез чистарту баганасына Buffer viRW2 кушып, бүлмә температурасында 5 минутка калдыра аласыз.Аннары тоз ионнары пычрануны бетерү өчен центрифугация эшләгез

2. РНК молекулаларында этанол калган

Тәкъдим: чистарту баганаларының Буфер viRW2 белән юылганын раслагач, эш күрсәтмәләрендә центрифуга тизлеге буенча буш торба центрифугациясен эшләгез.Әгәр дә этанол калган булса, калган этанолны иң зур күләмдә чыгару өчен буш торба центрифугациясеннән соң бүлмә температурасында 5 минутка калдырырга мөмкин.

Күрсәтмә кулланмалар:

Вируслы РНК изоляциясе комплекты күрсәтмәсе