Escherichia Coli O157: H7 Нуклеин кислотасын ачыклау комплекты (PCR флуоресцент тикшерү ысулы / лиофилизация)
Комплект тасвирламасы:
Мәче.FP103
Ул E. coli O157: H7ны тиз табу һәм тикшерү өчен кулланыла, азык, азык, су үрнәкләре һәм экологик үрнәкләрдә.
Тасвирламалар
Бу өчен кулланылаE. coli O157: H7 азык, азык, су үрнәкләрендә һәм экологик үрнәкләрдә тиз табу һәм тикшерү.
[Тест принцибы]
Флюоресцент PCR технологиясе принцибы буенча, махсус праймерлар һәм Такман зоналары Escherichia coli O157: H7 махсус гены өчен эшләнгән, һәм флуоресцент PCR коралы белән ачыкланган, шулай итеп Escherichia coli O157: H7 ДНКны сыйфатлы ачыклау.
Комплект эчтәлеге
Искәрмә: ROX канал тикшерүе кертелмәгән.
| Cкомпонентлар | Спецификация | Qуантлык |
| Буфер А. | Труба | 1 |
| Буфер В. | Труба | 1 |
| Позитив контроль | Труба | 1 |
| Тискәре контроль | Труба | 1 |
Көтелгән куллану
Бу өчен кулланыла E. coli O157: H7 азык, азык, су үрнәкләрендә һәм экологик үрнәкләрдә тиз табу һәм тикшерү.
Саклау шартлары һәм куллану вакыты
Караңгыда -20 at саклагыз, кат-кат туңудан һәм эрүдән сакланыгыз.
Эш вакыты 12айлар, һәм җитештерү вакыты тышкы пакетта күрсәтелә.
Инструментлар һәм куллану әйберләре
Флуоресцент санлы PCR инструменты, пипетка мылтыгы һәм туры килүче киңәшләр, вортекс салгыч, мини центрифуга.
Куллану
1. Ampleрнәк эшкәртү
1.1 ampleрнәк төре: Бу комплект азык, азык, су үрнәкләре һәм Escherichia coli O157: H7 белән пычранган дип шикләнелгән башка үрнәкләр өчен яраклы.Тирән эшкәртелгән ит продуктлары, эчемлекләр һәм пигментлар булган башка матдәләр өчен, аларны флюоресенция сигнал җыюына тәэсир итмәс өчен юарга кирәк.
1.2 ampleрнәк эшкәртү: "Эчеричия коли O157: H7 тест" Азык-төлек куркынычсызлыгы милли стандарт азык-төлек микробиологик экспертизасы "Эчеричия коли O157: H7.
- Nуклеин кислотасы чыгару
1,5 мл центрифуга трубасына 20 мл баету эремәсе алыгыз, 200 μЛ микробиаль лизат кушыгыз (өстәмә комплект кирәк), вортекс 30 секунд эчендә, кыска гына центрифуга һәм читкә куегыз.
Искәрмәләр: Лизаттан нуклеин кислотасын чыгару 10 минут эчендә тәмамланырга тиеш, һәм озак сакланып булмый.
3. Нуклеин кислотасын көчәйтү
3.1 Флюоресцент санлы PCR коралын куллану өчен кабызыгыз.
Буфер А һәм Буфер В комплектыннан, аларны яхшылап эретегез һәм кыска гына центрифуга.PCR реакция трубасына 18 μL Буфер А һәм 2 μЛ Буфер В кушыгыз.Аннары тискәре контрольнең һәрберсен 5 мл кушыгыз, чыгарылган нуклеин кислотасы, һәм уңай контроль PCR реакция трубаларына, трубаларны каплагыз, центрифуга кыска вакыт эчендә.
3.3.
| Адым | Программа | Cyикл саны |
| 1 | 37 ℃ 5мин | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3мин | 1 |
| 3 | 95 ° C 15с | 4 0 |
| 60 ℃ 30с (флюоресенция җыя) |
Проблемаларны анализлау өчен кулланмалар
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Бер РНК да чыгарып булмый, яисә нуклеин кислотасы аз
Гадәттә торгызу эффективлыгына тәэсир итүче бик күп факторлар бар, мәсәлән: РНК үрнәге, эш ысулы, элитация күләме һ.б.
Гомуми сәбәпләрне анализлау ：
1. Эш вакытында ванна яки түбән температурада (4 ° C) центрифугация.
Тәкъдим: Бүлмә температурасы (15-25 ° C), беркайчан да боз мунчасы һәм түбән температура центрифугасы.
2. Начар үрнәк саклау яки үрнәк саклау бик озак.
Тәкъдим: үрнәкләрне -80 ° C саклагыз яки сыек азотта туңдырыгыз, кат-кат туңдырудан сакланыгыз.РНК алу өчен яңа җыелган үрнәкләрне кулланырга тырышыгыз.
3. Лизис үрнәге җитми
Реклама: Зинһар, үрнәк һәм эш эремәсе (Сызыклы Акриламид) яхшылап кушылган һәм бүлмә температурасында 10 минутка инкубацияләнгәнен тикшерегез (15-25 ° C)
4.Элуент дөрес булмаган өстәлде
Реклама: Чистарту баганасы мембранасы уртасына RNase-Free ddH2O кушылганлыгына инаныгыз.
5.Бафер viRW2дагы сусыз этанолның дөрес булмаган күләме
Тәкъдим: Зинһар, күрсәтмәләрне үтәгез, Буфер viRW2-ка дөрес күләмле сусыз этанол кушыгыз һәм комплектны кулланганчы яхшылап кушыгыз。
6. Начар үрнәк куллану.
Тәкъдим: Буфер viRL 500μл өчен 200µл үрнәк.Артык үрнәк күләме РНК алу тизлеген киметәчәк.
7. Дөрес булмаган элитация күләме яки тулы булмаган элитация.
Тәкъдим: чистарту баганасының зур күләме 30-50μл;элитация эффекты канәгатьләнерлек булмаса, алдан җылытылган RNase-Free ddH өстәргә киңәш ителә2O һәм бүлмә температурасында урнаштыру вакытын 5-10мин
8.Пурификация баганасында Буфер viRW2 чайкаганнан соң этанол калдыклары бар.
Тәкъдим: Әгәр этанол Буфер viRW2 чайкаганнан соң һәм 2 минутка буш торбалы центрифугациядән кала икән, чистарту баганасы бүлмә температурасында 5 минутка буш торба центрифугациясеннән соң калган этанолны тулысынча бетерү өчен калырга мөмкин.
Чистартылган РНК молекулаларының деградациясе
Чистартылган РНКның сыйфаты үрнәк саклау, RNase пычрануы, эшләве кебек факторлар белән бәйле.
Гомуми сәбәпләрне анализлау ：
1. collectedыелган үрнәкләр вакытында сакланмады.
Тәкъдим: Әгәр үрнәк җыюдан соң кулланылмаса, аны тиз арада -80 at яки сыек азотта саклагыз.РНК молекулаларын чыгару өчен, мөмкин булган вакытта яңа җыелган үрнәкләрне кулланырга тырышыгыз.
2. Collыелган үрнәкләр кат-кат туңдырылды һәм эрелде.
Тәкъдим: үрнәк җыю һәм саклау вакытында кат-кат туңдырудан һәм эрүдән сакланыгыз (югыйсә, нуклеин кислотасы җитештерүчәнлеге кимиячәк).
3.RNase операция бүлмәсендә кертелде яки бер тапкыр кулланыла торган перчаткалар, битлекләр һ.б.
Тәкъдим: РНК молекулаларын эксперимент алу иң яхшы РНК операция бүлмәсендә башкарыла, һәм эксперимент таблицасы эксперимент алдыннан чистартыла.Эксперимент вакытында бер тапкыр кулланыла торган перчаткалар һәм битлекләр киегез, RNase кертү аркасында килеп чыккан РНК деградациясен булдырмагыз.
4. Реагент куллану вакытында RNase белән пычранган.
Тәкъдим: бәйләнешле экспериментлар өчен яңа Вируслы РНК изоляциясе комплекты белән алыштырыгыз.
5.Сентрифуга торбаларының RNase белән пычрануы, пипетта киңәшләре һ.б.
Чистартылган РНК молекулалары агымдагы экспериментларга тәэсир иттеләр
Чистарту баганасы белән чистартылган РНК молекулалары тоз ионнары яки протеиннар күп булса, агымдагы экспериментларга тәэсир итәчәк, мәсәлән: кире транскрипция, Төньяк блот һ.б.
1.РНК молекулаларында тоз ионнары калган.
Реклама: Буфер viRW2-ка дөрес сусыз этанол кушылганлыгына инаныгыз, һәм чистарту колоннасын эш күрсәтмәләрендә дөрес центрифугация тизлеге буенча ике тапкыр юыгыз salt Әгәр дә тоз ионнары калган булса, сез чистарту баганасына Buffer viRW2 кушып, бүлмә температурасында 5 минутка калдыра аласыз.Аннары тоз ионнары пычрануны бетерү өчен центрифугация эшләгез
2. РНК молекулаларында этанол калган
Тәкъдим: чистарту баганаларының Буфер viRW2 белән юылганын раслагач, эш күрсәтмәләрендә центрифуга тизлеге буенча буш торба центрифугациясен эшләгез.Әгәр дә этанол калган булса, калган этанолны иң зур күләмдә чыгару өчен буш торба центрифугациясеннән соң бүлмә температурасында 5 минутка калдырырга мөмкин.
Күрсәтмә кулланмалар:
Вируслы РНК изоляциясе комплекты күрсәтмәсе
