Проблеманы анализлау өчен кулланма

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Аз уңыш яки ДНК юк

Гадәттә геном ДНК җитештерүчәнлегенә тәэсир итүче күп факторлар бар, шул исәптән үрнәк чыганагы, үрнәк яше, үрнәкнең саклану шартлары һәм операция.

Геном ДНКны чыгару вакытында алып булмый

1. Тукымалар үрнәкләре дөрес сакланмыйлар яки бик озак сакланалар, нәтиҗәдә геном ДНК бозыла.

Реклама: тукымалар үрнәкләрен сыек азотта яки -20 саклагыз°С;геном ДНК алу өчен яңа җыелган үрнәкләрне кулланырга тырышыгыз.

2. ampleрнәкнең күләме бик аз, тиешле геном ДНКны чыгармаска мөмкин.

Тәкъдим: Озак вакыт сакланган яки каты геном ДНК деградациясе булган тукымалар үрнәкләре өчен, геномик ДНКны чыгару өчен, тукымалар үрнәкләре күләме тиешенчә артырга мөмкин.Ampleрнәкнең күләме ДНК ихтыяҗлары буенча билгеле була, ләкин яңа үрнәк 100мг, коры үрнәк 30мгдан артмаска тиеш.

3. ampleрнәк сыек азот белән җир түгел яки сыек азоттан соң бик озак урнаштырылмый.

Тәкъдим: ДНК чыгару вакытында, күзәнәк стенасын җимерер өчен, үрнәк сыек азот белән тулысынча җир булырга тиеш;тартканнан соң, зинһар, порошокны 65 җылытылган PL1гә күчерегез°С мөмкин кадәр тизрәк (җир порошогы эреп беткәч, геном ДНК тиз бозыла башлый).

4. Foregene Protease-ны дөрес сакламау активлыкның кимүенә китерә.

Реклама: Foregene Protease саклау шартларын раслагыз яки аны фермент гидролизы өчен яңа Foregene Protease белән алыштырыгыз.

5. Комплект дөрес сакланмаган яки бик озак сакланган, бу комплекттагы кайбер компонентларның эшләмәвенә китерә.

Реклама: Бәйләнешле операцияләр өчен яңа үсемлек геномик ДНК чыгару комплектын сатып алыгыз.

6. Комплектны дөрес кулланмау.

Тәкъдим: үсемлек геномик ДНКсын алу һәм чистарту өчен үрнәкләргә багышланган үсемлек ДНК изоляциясе комплектын сатып алыгыз.

7. Буфер WB асусыз этанол.

Реклама: Буфер WB-га абсолют этанолның дөрес күләмен өстәргә онытмагыз.

8. Элуент кремний мембранасына дөрес төшмәгән.

Тәкъдим: 65 яшьтә алдан җылытылган элуентны өстәгез℃кремний гел мембранасы уртасына тамчы, һәм бүлмә температурасында 5 минутка калдырыгыз.

Аз продуктлы геном ДНК алу өчен чыгару

1. ampleрнәк дөрес сакланмаган яки бик озак сакланган, нәтиҗәдә геном ДНК деградациясенә китерә.

Тәкъдим итү: тукымалар үрнәкләрен -20 саклагыз℃;Геном ДНК алу өчен яңа җыелган тукымалар үрнәкләрен кулланырга тырышыгыз.

2. Әгәр тукымалар үрнәкләре күләме бик аз булса, алынган геном ДНК азрак булыр.

Тәкъдим: Кайбер үсемлек үрнәкләре суга бай, алга кебек су үсемлекләре һ.б., дозасы тиешенчә артырга яки операция алдыннан бераз сусызланырга мөмкин.

3. Samрнәкләр сыек азот белән яхшылап җиргә салынмаган яки тартканнан соң бик озак бүлмә температурасында калдырылган.

Тәкъдим: сыек азот тарту җитәрлек булырга тиеш, һәм үрнәк күзәнәк стенасы мөмкин кадәр өзелергә тиеш;тартканнан соң, үрнәк порошокны 65кә күчерергә кирәк℃Киләсе адым өчен җылытылган Буфер PL1.

4. Дөрес комплектны кулланмау.

Тәкъдим итү: үсемлек геномик ДНКсын чыгару һәм чистарту өчен махсус үсемлек ДНК изоляциясе комплектын кулланыгыз.

5. Foregene Protease-ны дөрес сакламау активлыкның кимүенә китерә.

Реклама: Foregene Protease саклау шартларын раслагыз яки аны фермент гидролизы өчен яңа Foregene Protease белән алыштырыгыз.

6. Зур проблема

Реклама: Зинһар өчен, буфер EB кулланыгыз;ddH кулланса₂О яки бүтән элуентлар, элуентның pH 7.0-8.5 арасында булуына инаныгыз.

7. Элуент дөрес таммаган

Тәкъдим: Зинһар, кремний мембранасы уртасына элитация тамчысын кушыгыз һәм элитация эффективлыгын арттыру өчен 5 минут бүлмә температурасында калдырыгыз.

8. Элуент күләме бик кечкенә

Тәкъдим: Зинһар, элуентны геном ДНК элитациясе өчен күрсәтмәләр буенча кулланыгыз, ким дигәндә 100 дән ким түгелμl.

Аз чисталык белән алынган геном ДНК

Геном ДНКның түбән чисталыгы түбән экспериментларның уңышсызлыгына яки начар эффектына китерәчәк, мәсәлән: ферментны кисеп булмый, һәм максатлы ген фрагментын PCR ала алмый.

1. Төрле протеин пычрануы, РНК пычрануы.

Анализ: Буфер PW багананы юу өчен кулланылмады;Буфер PW багананы дөрес центрифугация тизлегендә юу өчен кулланылмады.

Тәкъдим: супернатант багана аша үткәндә, супернатантта явым-төшем булмасын өчен тырышырга;чистарту баганасын күрсәтмәләр буенча Буфер PW белән юарга онытмагыз, һәм бу адымны калдырып булмый.

2. Начарлык ион пычрануы.

Анализ: Буфер WB юу баганасы калдырылды яки бер тапкыр гына юылды, нәтиҗәдә калдык ион пычранды.

Реклама: Калдык ионнарын мөмкин кадәр бетерү күрсәтмәләре буенча Буфер WB белән ике тапкыр юыгыз.

3. RNase пычрануы.

Анализ: Буферга экзоген RNase өстәлә;Буфер PW-та дөрес булмаган юу операциясе RNase калдыкларына китерәчәк һәм витро транскрипция кебек түбән агымдагы РНК эксперименталь операцияләренә тәэсир итәчәк.

Тәкъдим: Форген сериясе нуклеин кислотасын чыгару комплектлары РНКны өстәмә RNaseсыз бетерә ала, һәм үсемлек ДНК изоляциясе комплектындагы барлык реагентлар RNase кирәк түгел;чистарту баганасын күрсәтмәләр буенча Буфер PW белән юарга онытмагыз, һәм бу адымны калдырып булмый.

4. Этанол калдыклары.

Анализ: Буфер WB белән чистарту баганасын юганнан соң, буш труба центрифугациясе ясалмады.

Реклама: Буш трубаны центрифугацияләү өчен күрсәтмәләрне үтәгез.

Инструкция өчен кулланма:

Antсемлек ДНК изоляциясе комплекты күрсәтмәсе