Без тәҗрибәле җитештерүче.Базарның мөһим сертификатларында күпчелекне җиңү Зур ташламалы Кытай югары сизгерлеге Бер адымлы тикшерү Rt-QpcrV2 комплекты, Сыйфат - заводның тормышы, клиентларның таләбенә игътибар итү - компаниянең яшәве һәм үсеше чыганагы, без сезнең килүегезне түземсезлек белән, намуслы һәм намуслы эш итәбез.
Без тәҗрибәле җитештерүче.Аның базарының мөһим сертификатларында күпчелекне җиңүКитай ДНК полимерасы, Qpcr, Безнең компания вәгъдә итә: бәяләр, кыска җитештерү вакыты һәм сатудан соң канәгатьләнерлек хезмәт, без сезне заводка теләгән вакытта килүегезне каршы алабыз.Хәзер безнең бергә күңелле һәм озак вакытлы бизнес алып баруыбызны телим !!!

Тасвирламалар

Бу комплект уникаль лизис буфер системасын куллана, ул РТ-qPCR реакцияләре өчен культуралы күзәнәк үрнәкләреннән тиз арада РНКны чыгара ала, шуның белән күп вакыт һәм күп РНК чистарту процессын бетерә.РНК шаблонын 7 минутта гына алырга мөмкин.Комплект белән тәэмин ителгән 5 × туры RT микс һәм 2 × туры qPCR Mix-SYBR реагентлары реаль вакытта санлы PCR нәтиҗәләрен тиз һәм эффектив ала ала.

5 × Туры RT Микс һәм 2 × Туры qPCR Микс-SYBR ингибиторның толерантлыгына ия, һәм үрнәкләрнең лизаты турыдан-туры RT-qPCR шаблоны буларак кулланылырга мөмкин.Бу комплектта уникаль РНК югары якынлыклы Foregene кире транскриптаз, һәм Hot D-Taq DNA полимерасы, dNTPs, MgCl бар.₂, реакция буферы, PCR оптимизаторы һәм стабилизатор.

Характеристикалар

200 × 20μl Rxns, 1000 × 20μl Rxns

Комплект компонентлары

Featuresзенчәлекләр һәм өстенлекләр

■ Гади һәм эффектив: Cell Direct RT технологиясе белән РНК үрнәкләрен 7 минут эчендә алырга мөмкин.

Demand ampleрнәк сорау кечкенә, чөнки 10 күзәнәк сынап карарга мөмкин.

■ putгары үткәрү: ул 384, 96, 24, 12, 6 кое тәлинкәләрдә культуралы күзәнәкләрдә РНКны тиз таба ала.

■ ДНК Эразеры чыгарылган геномнарны тиз арада бетерә ала, алдагы эксперимент нәтиҗәләренә йогынтысын киметә ала.

RT Оптимальләштерелгән RT һәм qPCR системасы ике этаплы RT-PCR кире транскрипцияне эффективрак һәм PCR конкретрак итә, һәм RT-qPCR реакция ингибиторларына чыдамрак итә.

Комплект кушымтасы

Куллану күләме: культуралы күзәнәкләр.

- Лизис үрнәге белән чыгарылган РНК: бу комплектның RT-qPCR шаблонына гына кагыла.

- Комплектны түбәндәге максатларда кулланырга мөмкин: ген экспрессиясен анализлау, siRNA-арадашлы ген сүндерү эффектын тикшерү, наркотиклар тикшерү һ.б.

Диаграмма

Саклау һәм саклану вакыты

Бу комплектның I өлеше 4 at сакланырга тиеш;II өлеш -20 at сакланырга тиеш.

Foregene Protease Plus II 4 at сакланырга тиеш, -20 at туңмагыз.

Реагент 2 × Туры qPCR Микс-SYBR караңгыда -20 at сакланырга тиеш;еш кулланылса, ул шулай ук ​​кыска вакытлы саклау өчен 4 at та сакланырга мөмкин (10 көн эчендә кулланыгыз) .Без тәҗрибәле җитештерүче.Базарның мөһим ташламалы сертификатларында күпчелекне җиңү Кытайның югары сизгерлеге Бер адымлы тикшерү Rt-Qpcr Kit V2, Сыйфат - завод тормышы, клиент таләбенә игътибар итү - компаниянең яшәве һәм үсеше чыганагы, без сезнең килүегезне түземсезлек белән көтәбез!
Зур ташламаКитай ДНК полимерасы, Qpcr, Безнең компания вәгъдә итә: бәяләр, кыска җитештерү вакыты һәм сатудан соң канәгатьләнерлек хезмәт, без сезне заводка теләгән вакытта килүегезне каршы алабыз.Хәзер безнең бергә күңелле һәм озак вакытлы бизнес алып баруыбызны телим !!!

QuickEАсыTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Такмan

Мәче.ДРТ-01021/01022

Cell 1000,000 күзәнәк кулланып туры RT-qPCR күзәнәкләре өчен

Продукция белән таныштыру

Бу продукт уникаль лизис буфер системасын куллана, РТ-qPCR реакцияләре өчен культуралы күзәнәк үрнәкләреннән тиз чыгару, күп вакыт таләп итә торган һәм РНК чистарту процессын юкка чыгару, һәм кирәкле RNA шаблонын алу өчен 7 минут кына, комплект белән тәэмин ителгән 5 × туры RT Mix, 2 × туры qPCR Микс-Такман реаль вакытта санлы PCR нәтиҗәләрен ала ала.

5 × Туры РТ Микс һәм 2 × Туры qPCR Микс-Такман ингибиторның толерантлыгына ия һәм шаблон рәвешендә үлчәү үрнәгенең лизатасын кулланып эффектив кире һәм конкрет көчәйтү эшләрен башкара ала.Реагентта Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA полимерасы, dNTP, MgCl бар₂, Reaction Buffer, PCR Оптимизатор һәм Стабилизатор, алар лизис буферы белән үрнәкләрне тиз һәм җиңел табу өчен кулланыла ала, һәм югары сизгерлек, үзенчәлек һәм тотрыклылык үзенчәлекләренә ия.

Продукция үзенчәлекләре

Гади, эффектив Cell Direct RT технологиясе, РНК үрнәкләрен алу өчен 7 минут вакыт кирәк.

Requirementрнәк таләпләр кечкенә, һәм минимум 10 культуралы күзәнәк эксперимент өчен кулланылырга мөмкин.

384, 96, 24, 12, һәм 6 кое тәлинкәләр кебек культуралы күзәнәкләрне тиз РНК алу өчен югары үткәрү.

ДНК Эразер чыгарылган геномнарны тиз арада бетерә ала, алдагы эксперимент нәтиҗәләренә йогынтысын киметә.

Оптимальләштерелгән ТР һәм qPCR системалары ике этаплы RT-PCRны эффектив кире транскрипция, спецификация һәм көчлерәк RT-qPCR реакция ингибиторы толерантлыгы белән тәэмин итә.

Комплект кушымтасы

Куллану күләме: Мәдәниятле күзәнәкләр.

Лизис үрнәге РНКны аңлатты: ике адымлы RT-qPCR шаблоны буларак кына кулланыла.

Комплектларны түбәндәге максатларда кулланырга мөмкин: ген көйләүче анализ, аллеле тест, наркотиклар тикшерү һ.б.

Комплект чикләүләре

Күчерелгән фрагментлар ≤ 300 б.

Комплектлар яңа культура күзәнәкләренә күнеккән.

Продукциянең сыйфатын контрольдә тоту

FOREGENE-ның гомуми сыйфат белән идарә итү системасы буенча, һәрбер туры комплект RT-qPCR серия комплектлары һәр комплектның сыйфатының ышанычлылыгын һәм тотрыклылыгын тәэмин итү өчен кат-кат сынала.

Комплект эчтәлеге

*:Кәрәзле Лизис, 5 × Туры Микс, 2 × Туры qPCR Микс-Такманны аерым сатып алып була, детальләр Кушымта 1 (13 БИТ).

Саклау шартлары

1. Тапшыру шартлары

Комплектның <4 ° C торышында булуын тәэмин итү өчен, түбән температуралы боз пакеты ташу процессы.

2. Саклау шартлары

I өлешне 4 ° C, II өлешне -20 ° C саклагыз.

Foregene Protease Plus II -20 ° C ка туңмаска, 4 ° C сакланырга тиеш.

Реагент 2 × Туры qPCR Микс-Такман -20 ° C, яки еш кулланылса (10 көн эчендә) кыска вакытлы куллану өчен 4 ° C саклана.

Комплект компоненты турында мәгълүмат

Буфер CL: күзәнәк лизис реакцияләре өчен кирәкле мохит белән тәэмин итә.

Буфер ST: Лизаттагы актив матдәне соңрак ТРга тәэсир итмәс өчен туктата.

ДНК Эразер: ДНКны бетерү, геномны бетерүнең алдагы экспериментларга тәэсире.

5 × Туры Туры Микс: Оптималь тигезләү өчен югары РНК якынлыгы Foregene Кире Транскриптаз, RNase Ингибиторы, dNTP, стабилизаторлар, көчәйткечләр, оптимизаторлар һәм кире транскрипция праймерлары бар (очраклы Пример, Олиго (dT))₁₈Праймер).

Foregene Protease Plus II: Лизис буферы контекстында күзәнәкләр нуклеин кислоталарын чыгару өчен лизланган.

2 × Туры qPCR Микс-Такман: ​​Бу реагентта кайнар D-Taq DNA полимерасы, dNTP, MgCl бар.₂, реакция буферы, PCR оптимизаторы, һәм стабилизатор.

20 × ROX Белешмә буяу: Гадәттә ABI, Стратаген һәм башка компанияләрнең Real Time PCR көчәйтү коралларында кулланыла, PCR доза хаталары аркасында PCR трубалары һәм трубалары арасындагы аерманы көйләү өчен кулланыла.Төрле инструментлар өчен кирәк булган 20 × ROX сылтама буяу концентрациясе төрле, һәм кулланучы аны коралның тәкъдим ителгән концентрациясе буенча өсти ала.

RNase-ddH₂O: Ике этаплы RT-qPCR реакцияләре өчен RNase-стерилизацияләнгән ультра чиста су.

Саклык чаралары:(Комплектны кулланганчы саклык чараларын игътибар белән укыгыз)

Samрнәкләр арасындагы пычранудан саклану өчен, экспериментның эш ысулына игътибар итегез.

RNase пычрануыннан һәм РНК деградациясеннән саклану өчен, эксперименталь мохит һәм савыт-саба чисталыгына игътибар итегез.

Яңа яки яхшы сакланган күзәнәк үрнәкләрен алыгыз һәм кат-кат туңдырылган күзәнәк үрнәкләрен кулланмагыз.

5 × Туры qPCR Микс, 2 × Туры qPCR Микс-Такман кат-кат туңдырудан сакланырга тиеш, югыйсә кире транскрипциягә һәм PCR эффективлыгына тәэсир итәчәк.

Препарационэлекоперация

Бу комплектны кулланганчы инструкцияне игътибар белән укыгыз.Cell Direct RT-qPCR комплекты гади, уңайлы һәм тиз эшләнә, һәм күрсәтмәләр бөтен комплект һәм аны ничек дөрес куллану турында тулы мәгълүмат бирә.Зинһар, куллану алдыннан кирәкле эксперименталь материаллар һәм җиһазлар әзерләгез.

Эксперименталь материаллар һәм җиһазлар

◆ Мәдәният күзәнәкләре.

◆ 1,5 мл яки 2 мл, RNase- / DNase-бушлай центрифуга трубасы, RNase- / DNase-Free оч, 0,2 мл стериль qPCR трубасы.

◆ qPCR машинасы, пипетта, планшет центрифугасы (≥13,400×g) (эксперименталь ихтыяҗларга карап) һ.б.

Куркынычсызлык

◆ Бу продукт фәнни тикшеренүләр өчен генә, зинһар, аны фармацевтика, клиник, азык-төлек һәм косметик максатларда кулланмагыз.

Chemical Химик матдәләр кулланганда, тиешле лаборатория киеме, перчатка, саклагыч стакан һ.б. киегез.

Операциякүрсәтмәләр

Кәрәзле Лизис системалары, ТР системалары, һәм qPCR реакция чишелеше өстәмә пакетларын Кушымта 1 (13 БЕТ) детальләре өчен аерым сатып алырга мөмкин.

Операция өчен кулланма

А: РНК чыгару үрнәге

1.Келллар алдан ясалганнар: күзәнәк культурасы тәлинкәсен салкын ПБС белән юыгыз, аннары күзәнәкләрне лизлагыз (10-10⁶), 10⁶ күзәнәкләр күләменә караганда, РНКны чыгару һәм чистарту өчен, күзәнәкне RNA изоляциясе комплекты (DE-03111) яки хайваннарның гомуми RNA изоляциясе комплекты (DE-03011) тәкъдим итәләр.

1.1.Ябыштырылган күзәнәкләр (мисал итеп 24 тәлинкә)

1.1.1.Wellәр коедагы күзәнәкләр санын билгеләгез, күзәнәкләр саны 1 × 10 булуын билгеләгез⁵, һәм культура савытыннан культураны чыгару өчен пипетка кулланыгыз.

1.1.2.Wellәр коега 200 μл алдан суытылган 1 × ПБС кушыгыз.Кабат торба куймагыз һәм ПБСны коедан чыгармагыз.Тәлинкәне ябыштырыгыз һәм мөмкин кадәр күбрәк ПБСны алыгыз.2 нче адымга бар.

1.1.3.Күзәнәк юу өчен төрле күзәнәк культурасы савыты яки күзәнәк культурасы савытында 1-1 сылтама таблицасы өстәлде.

Таблица 1-1: Төрле күзәнәкләр өчен ПБС дозасы

Тамга：Каты ябыштырылган күзәнәкләрне тәэмин итү，юганда күп санлы күзәнәк югалтудан сакланган.

1.2.Асылмалы күзәнәкләр яки ябык күзәнәкләр күзәнәк булмаган тәлинкәләрдә культуралы

1.2.1.Күп булмаган скважиналарда культуралы ябыштырылган күзәнәкләр (асылмалы күзәнәкләр киләсе адымнан башлана), күзәнәкләрне гадәти күзәнәк җыю ысулы буенча җыялар һәм аералар, һәм аларны культура тәлинкәсенә яки центрифуга торбасына урнаштыралар;трипсинизация кулланылса, күзәнәкләрне җыю һәм трипсинны чыгару өчен центрифугация таләп ителә, күзәнәкләрне таркату өчен ПБС реанимацияләнгән күзәнәкләрне аерым күзәнәкләргә өстәде.

1.2.2.Күзәнәкләр саны саналганнан соң, 1 × 10⁵ бер центрифуга торбаларына, центрифуга ярдәмендә күзәнәкләрне 10 × г өчен 10 минутка туплагыз.

1.2.3.Centентрифуга трубасына 200 μл ПБС кушыгыз, кат-кат тормагыз һәм турыдан-туры ПБСка омтылыгыз.2-нче адымны дәвам итегез.

2. Сату лизисы: Буфер CL-ны алып ташлагыз, аның температурасы бүлмә температурасына тигезләнгән, ДНК Эразеры һәм Форген Протиз Плюс II, түбәндәге таблица буенча 1-2 әзерләнгән лизис системасы: (Лизис эремәсе кулланырга әзер).

Таблица 1-2: ярылу система әзерләү (Искәрмә: боз өстендә әзерлектә)

3..

Тамга：Күпчелекләр барлыкка килмәсен өчен, зинһар өчен, пипетка масштабы 200μл яки аннан да азрак көйләнгәндә.Күзәнәкләр лизистан соң болытлы булып күренергә мөмкин, бу нормаль.

4..

Тамга：Липатның кушылуын тәэмин итеп, торба очлары җир астына ташланды，күбекләр барлыкка килмәсен өчен, зинһар, торба үткәргеч масштабы 200μл яки аннан да азрак көйләнгәндә.

Таблица 1-3：Буфер ST өстәгез

5.Лизат алдагы RT-qPCR экспериментлары өчен кулланыла.Киләсе экспериментлар вакытында үткәрелмәсә, зинһар, аны 2 сәгатьтән артык бозда саклагыз, -20 ℃ яки -80 at саклагыз (өч айдан артык түгел).

Б: ТР системасын әзерләү

1. 5 × Туры РТ Миксны алыгыз һәм аны боз мунчасына урнаштырыгыз, табигый рәвештә эреп китсен, соңрак куллану өчен йомшак кына кушыгыз;RNase-Free ddH2O чыгарып, аны эретегез һәм соңрак куллану өчен боз мунчасына урнаштырыгыз.Боздагы реакция системасын түбәндәге таблица буенча әзерләгез.

Таблица 2-1: ТР реакция системасын әзерләү

2.Система формулировкасы тәмамланганнан соң, йомшак кына катнаш һәм центрифуга белән түбәндәге таблицада 2 -2 реакция шартларында ТР реакциясе.

Таблица 2-2: ТР реакция шартларын көйләү

3. Реакция тәмамланганнан соң, реакция продукты турыдан-туры qPCR өчен боз өстенә куелды, зинһар, озак вакыт саклау -20 ℃ яки -80 put куегыз.

Искәрмә: чистартылмаган шаблон куллану аркасында кире транскрипция продуктында ак явым-төшем барлыкка килергә мөмкин.Бу гадәти күренеш.Киләсе экспериментлар өчен шунда ук супернатантны центрифуга.

Нәтиҗә ясалган ТР реакция чишелеше киләсе адым Real Time PCR реакция системасына өстәлә, реакция системасының 10-30% га кадәр күләмнәр өстәргә киңәш ителә.

C: qPCR реакция системасын әзерләү

1. Реакция системасын әзерләү өчен түбәндәге таблица буенча cDNA шаблонында тиешле B күләме әзерләнгән.

Искәрмә: cDNA шаблоны күләме qPCR системасының 10-30% тәшкил итә.Мәсәлән, 20μl qPCR системасында 2-6 μл лизис буферы кушыгыз, ләкин 6 μлдан артык түгел.

2. qPCR реакциясе өчен оптимизация яхшы qPCR шартлары (Аннальинг температурасы һ.б.) (3-2 таблицада бирелгән реакция шартлары).

Искәрмә: яхшырак нәтиҗәләргә ирешү өчен qPCR реакцияләре өчен оптимальләштерелгән шартларны кулланырга тырышыгыз.

Таблица 3-1: PCR реакция системасын әзерләү

1 *: Праймер концентрациясе начар булганда 50-900 nM диапазонында көйләнергә мөмкин.

Искәрмә: qPCR системасы эксперимент ихтыяҗлары һәм флуоресцент велосипед моделе буенча көйләнергә мөмкин.QPCR өчен 50μl системасы, реагент дозасын 20 буенча пропорциональ көйләгезμl системасы.

2 *: Флюоресенция санлы җылылык велосипедчысы буенча ROX Белешмә буяуның соңгы концентрациясен сайлагыз.Гомуми флюоресенция санлы велосипедчылар өчен иң туры ROX сылтама буяу концентрацияләре түбәндәге таблицада күрсәтелгән:

Таблица 3-2: qPCR реакция шартлары бирелгән

Искәрмә: иң яхшы qPCR эффектын алу өчен, градиент PCR төрле шаблоннар һәм төрле праймерлар өчен реакция шартларын оптимальләштерү өчен кулланылырга мөмкин.PCR реакция шартлары флуоресцент анализаторга, шаблонга, праймерга һәм башкаларга карап үзгәрә. Конкрет операциядә оптималь реакция шартлары флуоресцент санлы җылылык велосипедчысы, шаблон төре, кызыксыну фрагментының зурлыгы, көчәйтелгән фрагментның төп эзлеклелеге һәм GC эчтәлеге һәм праймерларның озынлыгы, анналь температура, реакция вакыты һ.б.

Real Time PCR праймериз принциплары

Алга пример һәм кире пример

Real Time PCR өчен праймериз дизайны бик мөһим.Праймерлар PCR көчәйтүнең үзенчәлеге һәм эффективлыгы белән бәйле, һәм түбәндәге принципларга таянып эшләнергә мөмкин:

◆ Праймер озынлыгы: 18-30bp.

◆ GC эчтәлеге: 40-60%.

◆ Tm кыйммәте: Праймер 5 кебек праймериз дизайн программалары, праймерның Tm кыйммәтен бирә ала.Агымдагы һәм агымдагы праймерларның Tm кыйммәтләре мөмкин кадәр якын булырга тиеш.Tm исәпләү формуласын да кулланырга мөмкин: Tm = 4 ° C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR эшләгәндә, 5 ° C примердан түбән температура, гадәттә, аннальинг температурасы итеп сайлана (анналь температураның тиешле артуы PCR реакциясенең үзенчәлеген арттырырга мөмкин).

◆ Праймерлар һәм PCR продуктлары:

PCR Дизайн праймериз PCR көчәйтү продуктының озынлыгы яхшырак 100-150bp.

The Шаблонның икенчел структур өлкәсендә дизайн праймериз мөмкин кадәр сакланырга тиеш.

Up Агымдагы һәм аскы агымның 3 ′ очлары арасында 2 яки күбрәк тулыландыргыч нигезләр барлыкка килүдән сакланыгыз.

◆ Праймер 3 ′ терминал базасы 3 өстәмә G яки C белән була алмый.

◆ Праймерларның үзләре тулыландыручы структураларга ия була алмыйлар, югыйсә PCR көчәйтүенә тәэсир итеп, чәч структурасы барлыкка киләчәк.

◆ ATCG праймер эзлеклелегендә мөмкин кадәр тигез таратылырга тиеш, һәм 3 ′ терминал базасы Т кебек сакланырга тиеш.

Кушымта1：Cell DirectRT-qPCR Комплектt өстәмә пакет

1. Лизис чишелешен чакырыгыз