RNase - сизгер сүз, еш РНК чыгару экспериментларын үткәргән студентлар ишетергә теләми.Тулы коралланган, ниһаять, бик агулы реагентлар фенол һәм хлороформ белән алынган РНК бозылды.Мин татулашмыйм!!!Бүген, әйдәгез, танылган Rnase-ның килеп чыгышын карыйк.

Рибонуклаз (RNase), яки RNase - РНКны кечкенә молекулаларга гидролизлый ала торган нуклеаз.RNase, кечкенә молекула протеины буларак, гадәттән тыш тотрыклы .Гадәттәге югары температура һәм югары басымлы пар стерилизациясе һәм протеин ингибиторлары аны тулысынча активлаштыра алмыйлар.RNase-ның тотрыклылыгы, нигездә, структурадагы диффид бәйләнешләреннән килә.Мисал өчен, ашказаны асты бизенең еш кулланыла торган RNase 124 аминокислотасы бар, ләкин 4 диффид бәйләнеше бар.Күкерт бәйләнеше һәм диффид бәйләнеше RNase искиткеч җылылык тотрыклылыгы бирә.Моннан тыш, рназ чагыштырмача кечкенә молекуляр авырлыкка ия ​​һәм күп очракта оригиналь конформациясен тиз торгыза ала.

Бик тотрыклы булудан тыш,Лабораториядә RNases бөтен җирдә бар .RNase - биологик оборона механизмы.Күзәнәк өчен экзоген РНК еш үлемгә китерә.Экзоген ДНК белән чагыштырганда, экзоген РНК ешрак куркынычрак.РНК шатланып транскрипцияләнә һәм тәрҗемә ителә, шуңа күрә барлык организмнар диярлек RNasesны экзоген РНК һөҗүменнән саклар өчен эволюцияләделәр.Шуңа күрә, лабораториядә үстерелгән бактерия күзәнәкләре һәм сез РНК чыгаручы RNase хуш исен чыгарасыз.Кеше тәнендәге сыеклыклар (тозак, күз яшьләре һ.б.) күп күләмдә RNase бар, шуңа күрә РНК бозылганда еламагыз.Күпме еласаң, РНК деградациясе начаррак!!Дайю апа РНК алу өчен яраксыз!

Моннан тыш, сезнең нечкә тирегездә бик күп RNase бар, һәм тире белән кагылган маркерлар, пипеталар, суыткыч ишекләр, ишек тоткычлары да RNaseны үз эченә ала.

Бик күп рамбулинг белән, әйдәгез RNases белән эш итүне карыйк.

РНКны бетергәндә һәркем уйлаган беренче нәрсәDEPC(диетил пирокарбонаты).DEPC, нигездә, RNase актив группасы гистидинының имидазол боҗрасы белән кушылып, фермент эшчәнлеген тыя.0,1% DEPC Rnase'ка яхшырак чыгару эффекты булырга мөмкин, ләкин без DEPC билгеле карсиноген булуына игътибар итергә тиеш, шуңа күрә аны кулланганда аеруча игътибар бирелергә тиеш.

RNase өчен безгә ике аспекттан башларга кирәк,беренчесе - эндоген RNase эшчәнлеген тыю

Тризолдагы гуанидин изотиокянат һәм DTT кебек гадәти РНК чыгару реагентлары RNase диффид бәйләнешен ача ала, ләкин кайбер RNases бар, аеруча тукымалар үрнәкләрендә, шуңа күрә түбән температурага игътибар итегез.

1.Токым үрнәген шунда ук сыек азотка яки коммерция РНК саклау эремәсенә чумыгыз.

2.Күзәнәк үрнәгенең РНКын чыгарганнан соң, аны лизис эремәсенә кушыгыз һәм боз тартмасына ябыштырыгыз

3. Сыек азотны тарту өчен куллану яхшырак тукымалар үрнәкләре гомогенизацияләнгәндә.Электр гомогенизаторын сыек азотсыз кулланганда, гомогенат адаптерны тулысынча суытуга игътибар итегез.

Икенчесе - экзоген DNase

1.Тулы кораллы булыгыз, лаборатория пальто киегез, битлек киегез һәм бер пар яңа перчатка киегез (алай ук ​​усал булмагыз! Тризол супер коррозицион, һәм ул перчаткалар аша бик көчле, шуңа күрә кулларыгызга таммагыз).

2.Барлык кулланылган пипетка киңәшләре, EP трубалары, PCR трубалары һәм башка җиһазлар de-RNase белән эшкәртелергә тиеш.Аны 0,1% DEPC белән суга, аннары югары басым астында басым ясарга мөмкин.Төтен капотындагы операциягә игътибар итегез.Localирле золымчылар ферментларны бетерү өчен кулланыла торган әйберләрне турыдан-туры сатып ала ала.

PS: Сезгә ялкау ысулны әйтим.Highгары температура һәм югары басым RNaseны тулысынча бетерә алмаса да, аның зур өлешен бетерәчәк.2 тапкыр югары температура һәм югары басым яхшы эффект бирә, һәм РНКны чыгару аз тәэсир итә.

3.Алкоголь белгечләрне аера ала,шулай итеп РНК чыгару таблицасы 75% спирт белән сөртелергә мөмкин , һәм перчаткалар шулай ук ​​спирт белән сиптерелергә мөмкин.

4.Соңгы РНК эретүче эремә һәм центрифуга трубасы шулай ук ​​de-RNase белән эшкәртелергә тиеш.DEPC суы - еш кулланыла торган РНК эретү эремәсе.DEPC суын дөрес әзерләү ысулы турында сөйләшик (коммерция DEPC сатып алгач, аны кире кайтарырга онытмагыз).

УЗИ суына DEPC кушыгыз, 1: 1000, яхшы селкетегез, төнлә 37 ° C торыгыз, һәм 151 минут югары температурада һәм югары басым астында 121 ° C стерилизацияләгез.DEPC суы -20 ° C температурада 1мл аликотларда сакланырга мөмкин.

Ниһаять, йомгак ясау: түбән температура ачкыч, куллану әйберләре яхшы эшләнә, тулы коралланган һәм аз сөйләшү!

Бу, бүгенге стратегия өчен.Сезгә күрсәткән барлык РНК концентрациясен һәм чисталыгын телим.А260 / А280 икесе дә 2.0!!!

Әлбәттә, куллансаңбүлмә температурасы операциясе РНК чыгару комплекты, сез югарыдагы проблемалар белән очрашмаска мөмкин.

Бүлмә температурасында эшләү, DNase кушмыйча, 11 минут эчендә күзәнәкләрдән гомуми РНКны чыгарып, 30 минут эчендә хайван тукымаларыннан яки үсемлекләрдән гомуми РНКны чыгарып җибәрә.

Сынау үрнәкләре өчен мөрәҗәгать итегез:overseas@foregene.com

Бәйләнешле продуктлар:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/