Традицион кире транскриптазлар югары температураларга түзә алмыйлар (MMLV эшчәнлеге өчен оптималь температура 37-50 ° C, AMV - 42-60 ° C).Катлаулырак вируслы РНК түбән температурада cDNAга эффектив рәвештә кире күчерелә алмый, нәтиҗәдә ачыклау эффективлыгы кими.Традицион RT-qPCR, гадәттә, ике төп ферментның (кире транскриптаз һәм ДНК полимеразы) катнашуын таләп итә, бу реакция системасы эшчәнлеген гадиләштерергә һәм бәяне киметергә мөмкин түгел.Монда без ике югары температурага чыдам кире транскриптаз, TtH һәм RevTaq тәкъдим итәрбез.Бу ике фермент шулай ук ​​ДНК полимераз функциясенә ия, шуңа күрә алар бифункциональ ферментлар дип атала.

TtH ДНК полимерасы

Сез TtH турында ишеткәнсездер, ул термофил бактериясеннән алынган Термус термофил HB8.Mg2 + кебек дивалент катионнар булганда, аның ДНК полимераз активлыгы бар.Бу Так ферменты кебек PCR реакцияләрендә киң кулланыла, ләкин ул Так ферментына караганда җылылыкка каршы тора, шуңа күрә ул югары GC эчтәлеге шаблоннары белән PCRга яхшырак тәэсир итә.

· Бу ферментның нигездә 3 ′ → 5 ′ экзонуклаз активлыгы һәм 5 ′ → 3 ′ экзонуклаз активлыгы юк, шуңа күрә ул дидокси эзләү өчен дә кулланылырга мөмкин.

· Бу ферментның RTase эшчәнлеге бар.Mn2 + булганда, RTase активлыгы көчәйтеләчәк.Бу функцияне кулланып, ул кире транскрипция реакциясен һәм PCR реакциясен шул ук трубада, ягъни бер адымлы RT-PCR башкару өчен кулланырга мөмкин.Ләкин, Mn2 + булганда, RT-PCR төгәллеге югары түгел.ТР эшчәнлегенең rnaase H эшчәнлеге белән бернинди бәйләнеше юк.

· Tth-DNA полимеразының активлыгы (pH9, оптималь + 55 ℃ ～ + 70 ℃, максимум + 95 ℃) РНК икенчел структурасы аркасында килеп чыккан проблемаларны җиңә.Нәтиҗә ясалган cDNA PCR белән Mg2 + ионнары булганда шул ук фермент белән көчәйтелә ала.

· Tth-DNA полимеразының кире транскрипция һәм югары температурада ДНК көчәйтү сәләте бу ферментны санлы RT-PCR, клонлаштыру, кәрәзле һәм вируслы РНКның ген экспрессиясен анализлау өчен файдалы итә.
· T-DNA полимерасы RT-PCR өчен РНКны 1 кб га кадәр көчәйтү өчен кулланыла.

Featuresзенчәлекләр һәм өстенлекләр

Өченче ДНК полимерасы:

• Оптимальләштерелгән полимераз чылбыр реакциясен (PCR) продукт күләмен, RT-PCR реакциясендә ким дигәндә 1000 ат көчен тәэмин итегез.

• үзгәртелгән дезоксирибонуклеозид трифосфатын субстрат итеп кабул итегез

• RNase H эшчәнлеге белән бәйле түгел

• Проблемаларны җиңәр өчен югары җылылык тотрыклылыгы бар, гадәттә РНКда булган югары икенчел структура белән бәйле

RevTaq RT - PCR ДНК полимерасы

Кире транскриптаз активлыгы белән җылылыкка чыдам ДНК полимерасы

RevTaq-RT-PCR-DNA полимерасы - инженер, югары җылылыкка чыдам, кире функциональ фермент, кире транскриптаз һәм ДНК полимераз эшчәнлеге юнәлешле һәм ясалма эволюция ярдәмендә алынган.

95 ° C температурада RevTaq RT-PCR ДНК полимеразының ярты гомере 40 минуттан артык.

· RevTaq RT-PCR ДНК полимерасы югары температуралы кире транскрипцияне турыдан-туры РНК шаблоныннан алырга мөмкинлек бирә, һәм кире транскрипция адымы күбрәк CDNA шаблоннары булдыру өчен берничә тапкыр кабатланырга мөмкин.

· RevTaq RT-PCR ДНК полимерасы "нуль адым" RT-PCR мөмкинлеген бирә (изотермаль кире транскрипция адымы юк), чөнки цикллы PCR киңәйтү адымында кире транскрипция һәм ДНК көчәйтү бер үк вакытта була.Бу шулай ук ​​югары температурада кире транскрипция реакциясенә ярдәм итә, шуның белән югары температурада РНКдагы көчле икенчел структураны эретүдә булган проблемаларны киметә.

· Аптамерга нигезләнгән кайнар старт формуласы аркасында, RevTaq RT-PCR ДНК полимерасы аннальинг һәм киңәйтү температурасы 57 ° C-тан югары булганда яхшырак нәтиҗәләр китерәчәк.

· Ферм җылылыкка чыдам булганлыктан, бик эретү нокталары булган примерларны һәм зоналарны эшләргә киңәш ителә (> 60 ° C).

· Реакция урнаштыру процессында температура градиенты аша аннальинг / киңәйтү адымының температурасын оптимальләштерү тәкъдим ителә.

· Температура никадәр югары булса, PCR үзенчәлеге шулкадәр югары.Кире транскрипция циклы, гадәттә, PCR циклына караганда югарырак температурада башкарыла, чөнки ДНК Пример: РНК Шаблоны гибридизациясе гадәттә ДНК Примерына караганда эретү ноктасына ия: cDNA Шаблон дуплексы.

· RevTaq RT-PCR ДНК полимерасы генетик инженер һәм оптимальләштерелгән, һәм ампликон зурлыгы 60-300 б.т.

RevTaq RT-PCR ДНК полимеразын ачыклау лимиты 4 данәгә җитә /

Оптимальләштерелгән реакция системасы (югары эретү ноктасы примерларын булдыру) рәсемдә күрсәтелгән.RevTaq RT-PCR ДНК полимераз белән идарә итүче RT-PCR TaqPath 1 адымлы RT-qPCR мастер катнашмасына караганда яхшырак сизгерлек күрсәтә, һәм түбән ачыклау үрнәге эретү градиенты.

Күбрәк өстенлекләр:

Тиз башлау функциясе → Беренче җылылык денатурациясе адымын калдырып була.

Кайнар старт аптамер формуласы immediately 100% фермент активлыгын тиз арада тәэмин итегез һәм түбән температурада специаль булмаган көчәйтүне булдырмагыз (<57 ° C).

Чистарту функциясе → РНКны чыгару адымы калдырылды, чөнки RevTaq RT-PCR ДНК полимерасы шулай ук ​​чиста реакция үрнәкләрен эшкәртә ала.Ул кайнар RT-PCR циклында эукариотларның, бактерияләрнең һәм вирусларның күзәнәк мембраналарын шунда ук юк итә ала.

IVD чимал дәрәҗәсе → югары сыйфатлы стандартлар һәм бик конкурент бәяләр