Клейны торгызуны яхшырту өчен киңәшләр

1. Электрофорез вакытында үрнәк йөкне арттыру.

2. Яңа әзерләнгән электрофорез буферын кулланыгыз.

3. Клейны кискәндә, клей кисү күләмен киметү өчен клейны полосалар белән генә кисәргә тырышыгыз: аз максатлы фрагментлар белән клей кирәкми, югыйсә ул торгызу тизлегенә тәэсир итәчәк.

4. Ике яки күбрәк клей кисәкләрен эреткәннән соң, трубканы кулланыгыз, күләмнең зурлыгына карамастан, аны бер баганага күчерегез.

5. Солда кушылган эремә бераз күбрәк булырга мөмкин, бу ДНКны мембранага бәйләү өчен уңайлырак, ләкин гадәттә 750улдан артмый.

6. Гел торгызу ачкычы - тоз концентрациясе, кислотасы (корылмасы) һәм баганадагы эремәнең гидрофобиклыгы аша ДНКны баганага бәйләү.Шуңа күрә, электрофорез буферының pH артык зур булса, 10ул (pH 5.0, 3mol / L NaAC) кояшка кушылырга мөмкин;Мембранада ДНК молекулаларын яхшырак тоту өчен, клейны эреткәннән соң сыеклыкка 30% изопропанол кушылырга мөмкин.

7. Элиентны өстәгәнче, этанолны тулысынча парга әйләндерү өчен багананы бүлмә температурасында берничә минутка калдырыгыз (якынча 10 минут).

8. Ниһаять, торгызу күләмен киметү өчен азрак элуент өстәгез.Гадәттә, 30-50μl элуент элитация өчен кулланыла (бик аз түгел, югыйсә ул мембрананы дымландыра алмый, бу элитациягә ярдәм итми);элитация тамчылары мембрананың үзәгендә, мембранага бәйләнгән ДНКны тулысынча бетерү өчен.

9. Элуентны өстәгәннән соң, аны 55 градуслы су мунчасында 5 минутка чыгарырга яки 10 минуттан артык 50 градуслы су мунчасына урнаштырырга, яки төнлә 4 градус парафильм белән мөһерләргә, аннары икенче көнне торгызу өчен центрифуга салырга мөмкин, эффект яхшы.

10. centентрифугацияләнгән элуатны adsorption баганасына һәм центрифугага өстәгез.

PCR продуктын торгызу өчен җентекле ысуллар һәм процедуралар

1. Гади каучук эшкәртү

Әгәр дә сез клейны торгызырга телисез икән, уңайлы һәм торгызу дәрәҗәсе бераз югарырак булган комплектны куллану яхшырак.Әгәр дә сез аны чыннан да кул белән торгызырга тиеш булсагыз, клейны кискәннән соң TE күләмен 3 тапкыр өсти аласыз.Су мунчасында эреп беткәч, фенол, фенол / хлороформ чиста чыгарыла, һәм этанол ява.Бетте-китте.

2. Түбән эрү ноктасы гельләрдән ДНК торгызу

ДНК фрагментларын чистарту гель күләменә тигез булган TE (10 ммол / л Tris-HCl pH8.0, 0,1 ммол / л EDTA) кушыгыз, һәм гельне тулысынча эретү өчен 65 ° C су мунчасына 5 минут куегыз.

Бүлмә температурасына китерелгәннән соң, тигез күләмдә фенол (TE белән туендырылган, TE өске катламда мөһерләнгән, һәм аскы катлам фенол алынды) өстәлде, һәм катнашма әкрен генә кушылды (катнашырга кирәк түгел), һәм 12 минутта 3 минут эчендә центрифугацияләнде.1-2 тапкыр кабатлагыз.

Супернатантны алыгыз, этанол явым-төшемен үткәрү өчен 0,1 том 3мол / Л натрий ацетат (pH 5.2) һәм 2,5 тапкыр абсолют этанол кушыгыз.Чистартылган ДНКны тиешле күләмдә TE белән эрегез, эчтәлеген үлчәгез һәм кулланырга әзерләнегез (бу максатлы ген структурасын анализлау, тикшерү әзерләү һ.б.).

3. Яхшы көчәйтү үзенчәлеге белән PCR торгызу

PCR көчәйтүнең үзенчәлеге яхшы булса, бу PCR продуктын гади чистарту һәм торгызу гына.Сез PCR продуктына 50уг / мл протеиназ К, 1 сәг өчен 37 градус, фенол / хлороформа белән бер тапкыр чыгарып, хлороформ белән бер тапкыр чыгарып, супернатантның 0,1 күләмен өсти аласыз.Натрий ацетат 2,5 томлык абсолют этанол белән явым-төшем белән торгызылды.

Бәйләнешле продуктлар:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/