Күптән түгел мин гаҗәп нәрсә таптым!Аның тирәсендә күп алдынгы эксперимент белгечләре хәтта бик төп эксперименталь белемнәрне дә белмиләр.

Мәсәлән, сез түбәндәге сорауларга җавап бирә аласызмы?

OD260 белән A260 арасында аерма бармы?Аларның һәрберсе нәрсә аңлата?
ОД - оптик тыгызлыкның кыскартылуы (оптик тыгызлык), А - сеңдерүнең кыскартылуы (сеңдерү), ике төшенчә чынлыкта бер үк, "оптик тыгызлык" "үзләштерү", ләкин "оптик тыгызлык" күпчелек милли стандартларга туры килә һәм стандартлаштырылган.

Нуклеин кислотасы концентрациясен исәпләү өчен без гадәттә OD кыйммәтен 260нм белән үлчибез, димәк 1OD нәрсәне күрсәтә?
Нуклеин кислотасы максималь үзләштерү максимумы 260nm дулкын озынлыгында, анда ДНК һәм РНК, шулай ук ​​фрагментланган нуклеин кислотасы фрагментлары бар (бу төп пункт).
260 нм дулкын озынлыгында үлчәнгән OD бәясе OD260 итеп теркәлде.Әгәр дә үрнәк чиста булса, OD260 кыйммәте нуклеин кислотасы концентрациясен исәпли ала.
1 OD260 = 50 μg / мл dsDNA (ике катлы ДНК)
= 37 μг / мл ssDNA (бер катлы ДНК)
= 40 μг / мл РНК
= 30 μг / мл dNTP (олигонуклеотидлар)
RT-PCR, Realtime-PCR һәм QPCR арасында ниндидер бәйләнеш һәм аерма бармы?
Кире транскрипция PCR өчен RT-PCR кыска
Реаль Вакыт PCR = qPCR, Санлы Реаль Вакыт PCR өчен кыска
Реаль Вакыт PCR (реаль вакыттагы флуоресцент санлы PCR) һәм Кире Транскрипция PCR (кире транскрипция PCR) икесе дә RT-PCR дип кыскартылган кебек.Ләкин халыкара конвенция: RT-PCR кире транскрипция PCR турында.

Биологиядә ДНК / РНК озынлыгын тасвирлау өчен еш кулланыла торган nt, bp, kb нинди?
nt = нуклеотид
bp = төп пар пар
кб = килобаз

Әлбәттә, күпләр бу кечкенә детальләр турында уйламыйлар!Барысы да шулай эшли, һәм аның нәрсә икәнен беркем дә сорамас.Син моның кирәк түгеллеген беләсең, шулай бит?

, К,, к, юк, моны белү бик кирәк!ни өчен?
Чөнки сез мәкалә урнаштырырга телисез!Абый!Сез чыгарылышка омтыласызмы, фәнни тикшеренүләр казанышларыгызмы, сөйләү өчен мәкаләләргә таянырга тиеш!

Нуклеин кислотасын чыгару иң гади һәм төп эксперимент булырга тиеш.Нуклеин кислотасын чыгару сыйфаты турыдан-туры экспериментлар нәтиҗәләрен билгели.

Мин моны күп тапкыр әйтсәм дә, дуслар бик күп.Бу юлы мин мәкаләдән китәргә булдым!

MIQE дип аталган санлы реаль-вакыт PCR экспериментларын бастыру өчен минималь мәгълүмат, халыкара дәрәҗәдә башланган флуоресцент санлы эксперимент принциплары җыелмасы, ул флюоресенция санлы PCR экспериментларын бәяләү һәм мәкаләләр бастыру өчен кирәк булган эксперименталь мәгълүмат өчен минималь стандартларны тәкъдим итә.Эксперимент биргән эксперименталь шартлар һәм анализ ысуллары аша рецензияләүчеләр тикшерүченең эксперимент схемасының дөреслеген яхшырак бәяли алалар.

Күрергә була, нуклеин кислотасын чыгару бүлегендә түбәндәге ачыклау әйберләре тәкъдим ителде,

"E" бирелергә тиешле мәгълүматны күрсәтә, "D" кирәк булса бирелергә тиешле мәгълүматны күрсәтә.

Форма бик катлаулы, чынлыкта, әйтәсе килә, һәркемнән башларга кирәк

чисталык (D), уңыш (D), бөтенлек (E) һәм эзлеклелек (E) бу дүрт аспектта Нуклеин кислоталарын бәяләү.

Эксперименталь гадәтләр буенча, башта чисталыкны һәм концентрацияне бәяләү ысуллары турында сөйләшегез.

ОД үлчәү - экспериментлар өчен иң яраткан һәм иң җиңел ачыклау ысулы.Принципка килгәндә, мин монда детальләргә кермәячәкмен.Күпчелек лабораторияләр хәзерге вакытта нуклеин кислотасы үрнәкләрен санлы анализлау өчен ультра-микро спектропотометрлар кулланалар.Сүндерү кыйммәтен күрсәткәндә, программа концентрация кыйммәтен (нуклеин кислотасы, протеин һәм флуоресцент буяу) һәм аңа бәйле катнашуларны бирә.ОД кыйммәтен анализлауга килгәндә, бу рәсемне саклагыз, сез яхшы булырсыз.

Универсаль OD кыйммәт чишелеш исемлеге

Шулай да, сезнең өчен аерым чыгарылырга тиешле берничә мәгарә бар.

(Мин беләм, сез саклаучы һәм сезгә кирәк булганчы көтәргә тиеш!)

Искәрмә 1 Equipmentиһаз

ОД кыйммәте төрле җиһазларга тәэсир итәчәк.OD260 билгеле бер диапазонда булганда, OD230 һәм OD280 кыйммәтләре мәгънәле.Мәсәлән, гомуми Eppendorf D30ның 260nm тәэсир итү диапазоны 0 ~ 3A, һәм NanoDrop Thermo One 260nm.0,5 ~ 62.5А үзләштерү диапазоны.

Искәрмә 2Эретү реагенты

ОД кыйммәте төрле реагентларның эрүенә тәэсир итә ала.Мәсәлән, pH-та чистартылган РНКны OD260 / 280 уку7.5 10мм Трисбуфер 1,9-2.1 арасында, шул вакыттанейтраль су эремәсекатнашу түбәнрәк булыр, бәлки 1,8-2.0 гына, ләкин бу РНК сыйфаты аерманы үзгәртә дигән сүз түгел.

Искәрмә 3Калдык матдәләр

Калдык матдәләрнең булуы нуклеин кислотасы концентрациясен үлчәү төгәллегенә тәэсир итәчәк, шуңа күрә нуклеин кислотасы үрнәкләрендә протеин, фенол, полисахарид һәм полифенол калдыкларыннан сакланырга кирәк.

Ләкин, чынлыкта, органик реагентлар белән чыгару - иске ысул.Коммерция комплектларында, чыгару эффектына кремний нигезендәге adsorption баганасы ярдәмендә центрифугация белән кушылырга, чыгару авыр булган агулы һәм зарарлы органик реагентлардан сакланырга мөмкин һ.б. Проблема, мәсәлән.Форгенның нуклеин кислотасын чыгару комплекты, DNase / RNase һәм агулы органик реагентларны операция вакытында кулланмый, тиз һәм куркынычсыз, һәмэффектяхшы(очраклы рәвештә кашлы дип әйттеләр, ләкин беләсең килә).

Мисал 1: Геном ДНК чыгару уңышы һәм чисталыгы

Форген туфрак ДНК изоляциясе комплекты (DE-05511) төрле чыганаклардан туфрак үрнәкләрен эшкәртә, һәм алынган геном ДНК күләме һәм чисталыгы түбәндәге таблицада күрсәтелгән:
Мисал 2: тукымалы РНК чыгару уңышы һәм чисталыгы

Хайваннарның гомуми РНК изоляциясе комплекты (RE-03012) төрле тукымалар үрнәкләрен эшкәртте, һәм алынган РНК күләме һәм чисталыгы түбәндәге таблицада күрсәтелгән (тычкан тукымасы өчен):
Ләкин, сез OD кыйммәте белән эшләнгән дип уйламагыз.Сезнең фронтта мин ясаган төп фикерләр турында кайгыртуыгыз бармы?

Игътибар итегез

Фрагментланган нуклеин кислотасы молекулалары шулай ук ​​үзләштерүдә исәпләнәчәк.РНКда геном ДНК калдыклары бар дип уйлап, сезнең ОД кыйммәтегез бик югары булып күренәчәк, ләкин РНКның концентрациясен билгеләргә ярамый.Сезнең РНК булу-булмавы Деградация бармы-юкмы, билгеле түгел, шуңа күрә безгә төгәлрәк карар кабул итү өчен комплекслы бәяләү ысулы кирәк, ягъни MIQEда искә алынган нуклеин кислотасының бөтенлеген бәяләү.