Сез күпме беләсез

N турындауклеин кислотасы чыгару

Чистартылган нуклеин кислотасының башы һәм ахыры

Башта барысы да авыр, чистартылган нуклеин кислотасы иң күп

Соңгы экспериментлар өчен молекуляр экспериментлар башлау

Уңыш яки уңышсызлык бик мөһим йогынты ясый.

Эзләү / ультра эз UV спектропотометры күп фәнни тикшерүчеләр тарафыннан хуплана, чөнки ул нуклеин кислотасы концентрациясен, протеин һәм тоз ион калдыкларын гади, тиз һәм экономик яктан ачыклый ала.

Барыбызга да билгеле булганча, A260 нуклеин кислотасын сеңдерү OD кыйммәтен аңлата, A280 протеин концентрациясенең OD кыйммәтен аңлата, A230 тоз ионының концентрацияләнеше OD кыйммәтен аңлата, шуңа күрә A260 нуклеин кислотасы концентрациясен үзгәртә ала, A260 / 280 белок калдыкларын аңлата, A260 / 230 тоз ион калдыкларын аңлата, ләкин бу күп санлы тикшеренүләр нигезендә ачылган кагыйдә.гадәти"ДНК һәм РНК чисталыгын аңлатып бирә ала дип ышанубилгеле бер дәрәҗәдә.Бу нуклеин кислотасы җитештерүчәнлеген һәм чисталыгын ачыклау өчен бердәнбер стандарт түгел, ул белешмә буларак кына кулланыла, һәм ул "алтын стандарт" түгел.

Термо Фишер ND-2000 кулланмасы тест нәтиҗәләренең ышанычлылыгына басым ясый

Сәбәбе шунда: микро / ультрамикро УВ спектропотометры ярдәмендә алынган нәтиҗәләр нуклеин кислотасының уңдырышлылыгын һәм чисталыгын гына күрсәтәләр, һәм бик күп тәэсир итүче факторлар бар (оптик юл, үрнәк күләме, үрнәк концентрациясе, pH кыйммәте, сеңдерү үлчәвенә тәэсир итүче башка ионнар һ.б.), үлчәнгән OD бәясе төгәл түгел.Шул ук вакытта, үзләштерү кыйммәтен билгеләү материалының үзенчәлеге булмаганлыктан, бер полосалы ДНК, ике катлы ДНК, РНК, dNTP, һәм кайбер протеиннарның барысы да 260nm дулкын озынлыгында үзләштерү дәрәҗәсенә ия, һәм A260 белән билгеләнгән концентрация чын ДНК яки РНК түгел.Концентрация, һәм аның бөтенлеге һәм бозылуы хөкем ителми.

Шулай итеп безнең чистартылган нуклеин кислотасының сыйфатын ничек бәяләргә?Ачыклау өчен микро / ультрамикро УВ спектропотометрын кулланудан тыш, агароза гели электрофорезы кебек ысуллар шулай ук ​​нуклеин кислотасының чисталыгын һәм бөтенлеген визуаль рәвештә күрсәтергә һәм концентрацияне билгеле бер дәрәҗәдә күрсәтергә тиеш.Шул рәвешле, төрле ысулларны ачыклау нәтиҗәләреннән алынган нуклеин кислотасы җитештерүчәнлеге һәм чисталыгы ышанычлы.

Эксперименталь диаграмма чагыштыру

H1299 күзәнәкләренең геномик ДНКсы A компаниясенең ДНК чыгару комплектлары ярдәмендә чыгарылды, һәм зур пычраклык пычрануы күренде, нәтиҗәдә югары OD кыйммәтләре.

(ОД үлчәү бәясе һәм тиешле электроферограмма)

Бәяләү индексы

Нуклеин кислотасы җитештерү һәм сыйфатын тикшерү өчен "алтын стандарт" бармы?

Билгеле булганча, гади, тиз һәм арзан ысул юк.Спектропотометрмы, гель электрофорезы яки масса спектрометриясе, алар барысы да төрле яклардан эремәдә нуклеин кислотасының концентрациясен һәм чисталыгын чагылдыралар, һәм алар бер-берсенә мөрәҗәгать итеп хөкем ителергә тиеш.

Иң яхшы бәяләү индексы һәрвакыткиләсе эксперименталь кушымта.Кире транскрипция һәм PCR көчәйтү эффективлыгына тәэсир итми.Ышанычлы көчәйтү продуктлары һәм Ct кыйммәтләрен алу, һәм эзлеклелектә тулы эзлеклелек алу - уңышлы нуклеин кислотасын чыгару.

Йомгаклап әйткәндә, нисбәтле теория карашы "яхшы эксперименталь нәтиҗәләрне яхшы чыгару параметрлары итеп куллану" карашы белән шикләнергә тиеш!

ДНК / РНК чисталыгын алу өчен Foregene DNA RNA чыгару комплектлары тәкъдим ителә:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/