Куркынычсызлык

Озын кодсыз РНК, lncRNA - кодсыз РНК, озынлыгы 200 нуклеотидтан зуррак, гадәттә 200-100000 нт арасында.lncRNA эпигенетик, транскрипция һәм транскрипциядән соң ген экспрессиясен көйли, һәм X хромосоманы тынычландыруда, геномны бастыруда һәм хроматин модификациясендә, транскрипцияне активлаштыру, транскрипция интерфейсы, атом транспорты, күзәнәк циклын көйләү, күзәнәк дифференциациясен көйләү, һәм дозаның компенсация эффектлары (доза компенсациясе эффекты) һәм бик күп мөһим көйләү процесслары, үсеш һәм профилактика.

01  LncRNA төрләре һәм характеристикалары

lncRNA, югарыдагы рәсемдә күрсәтелгәнчә, формалашуның төрле чыганаклары буенча күп төрләргә бүленә.Түбәндәге үзенчәлекләргә ия:

1. lncRNAлар гадәттә озынрак, дифференциация вакытында динамик белдерү һәм төрле бүлү ысуллары белән
2. Кодлау геннары белән чагыштырганда, lncRNA гадәттә түбәнрәк дәрәҗәгә ия
3. Күпчелек lncRNA тукымаларны дифференциацияләү һәм үстерү процессында ачык вакытлы һәм киңлек күрсәтү үзенчәлегенә ия
4. Шешләрдә һәм башка авыруларда характеристик сүзләр бар
5. lncRNA-ның субкуляр урыннары төрле
6. Консервациядә эзлеклелек түбән, ләкин функция билгеле бер дәрәҗәдә саклау һ.б.

02 LncRNA Кире транскрипция турында еш бирелә торган сораулар

Күзәнәкләрдәге lncRNAның аз эчтәлеге, озын озынлыгы һәм югары дәрәҗәдәге структурасы аркасында, мондый РНК еш кына катлаулы структураларга ия була, һәм RT-qPCR уңышсыз кире транскрипция яки түбән эффективлык проблемаларына мохтаҗ.

03 LncRNA кире транскрипция чишелеше

Centralзәк кагыйдәдә, РНК вируслары үзләренең кире транскриптазларын кулланып, ДНКны шаблон итеп синтезлау өчен кире транскрипция дип атала.Витродагы cDNA шаблонын синтезлау өчен РНК вирусы кире транскриптаз куллану процессы кире транскрипция дип атала.Кире транскрипция системасына кертелгән төп элементлар: РНК шаблоны, кире транскриптаз, праймерлар һәм башка компонентлар.

1.RNA шаблоны

РНК шаблонының кире транскрипциягә тәэсире аның структурасында, чисталыгында һәм бөтенлегендә чагыла.Чыгарылган РНКның чисталыгы һәм бөтенлеге никадәр югары булса, кире транскрипциянең эффективлыгы һәм киләсе сан нәтиҗәләре төгәлрәк.Гадәттә кулланылган РНК чыгару реагентлары белән чистартылган РНК еш алкоголь һәм гуанидин тозлары калдыкларын үз эченә ала, алар күпчелек кире транскриптазга көчле комачаулый.

2. Транскриптазны карагыз

Кире транскриптаз бөтен кире транскрипция системасында төп йогынты ясый.Күпчелек лабораторияләрдә кулланылган кире транскриптаз өчен тиешле температура гадәттә 42 ° C.Чынлыкта, югары дәрәҗәдәге РНК структурасын ачу югары температура таләп итә, һәм кире транскриптазга таләпләр югарырак.

3.Праймер

Кире транскрипция праймерларына генга хас праймерлар, очраклы праймерлар һәм Oligo dT праймерлары керә.Күпчелек lncRNA-ларда polyA койрыклары юк, һәм очраклы праймерларны Oligo dT белән туры китерү мөһим.

4.Башка компонентлар

РНКны деградацияләү аеруча җиңел булуын исәпкә алып, кире транскрипция системасына компонентлар кертү минимальләштерелергә мөмкин, бу RNase керүгә эффектив комачаулый һәм кире транскрипциянең шома алгарышын тәэмин итә ала.

FорегенРНК шаблоныннан, qPCRга кире транскрипция ала

Сезнең lncRNA ачыклауны комплекслы озатыгыз

Хайваннарның гомуми РНК I..әр сүзнеңКомплект (gDNA бетерү баганасы белән)

Күзәнәкнең гомуми РНА I..әр сүзнеңКомплект (gDNA бетерү баганасы белән)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase белән) (lncRNAдан беренче катлы CDNA синтезы өчен супер премикс)

Реаль Вакыт PCR EasyTM-SYBR Яшел I.

Aөстенлекләр ofРНК чыгару:

Комплект өченче буын РНК чыгару технологиясен куллана, DNase кулланырга кирәкми.

96, 24, 12, һәм 6 кое тәлинкә культуралы күзәнәкләрдән 11 минут, gDNAсыз, югары чисталык, югары сыйфатлы гомуми күзәнәк РНКны югары эффектив чыгару.

LncRNA кире транскрипциянең өстенлекләре:

Геном ДНК пычрануын тиз арада бетерү өчен LncRNA өчен махсус транскрипция системасы эшләнгән.

Кире транскрипция системасы югары җылылык тотрыклылыгына ия һәм әле 50 ° C температурада яхшы кире транскрипция күрсәткечләренә ия.

GCгары GC эчтәлеге һәм катлаулы икенчел структурасы булган шаблоннар югары эффективлык белән кире кайтарылырга мөмкин.

Уңай якларыof qPCR:

Кайнар старт Форген Так Полимераз көчәйтү эффективлыгы, көчәйтү сизгерлеге, көчәйтү үзенчәлеге югары

Оптимальләштерелгән Real PCR Easy Mix SYBR Green-ны ачыклый, һәм аның флюоресенция интенсивлыгы охшаш продуктлардан 3-5 тапкырга артыграк, алар төрле флюоресенция санлы экспериментлар ихтыяҗларын канәгатьләндерә ала.