1 exper Эксперименталь әйберләрне вакытында алыштырыгыз

Тискәре контрольне урнаштырыгыз һәм аны берничә тапкыр кабатлагыз.Лабораториядә PCR продуктлары пычрануы ачыклангач, барлык эксперименталь кирәк-яракларны вакытында алыштырыгыз.Мәсәлән: праймерларны яңадан эретегез һәм әзерләгез, пипетка очын, EP трубасын, ddH2O һ.б. яңадан стерилизацияләгез, яңа торба белән алыштырыгыз, һәм PCR экспериментлары үткәрү өчен вакытлыча бүтән лабораторияләрне бурычка алыгыз.Пычратылган лаборатория вентиляцияләнергә һәм ультрафиолет нурлары белән нурланырга тиеш, эксперимент дәвам итәр алдыннан PCR продуктлары пычрануы бетерелгәнче.

2 UV UV экспозиция вакытын озайту

Әйтергә кирәк, ДНК пычрануын бетерү өчен, ультрафиолет нурлары гадәтигә караганда 2 сәгатькә озайтылырга тиеш.Шулай да, УВ нурланышының ДНК пычрануының кечкенә фрагментларын (200bp астыннан) чыгаруга тәэсире әле яхшы түгел.

Ультрафиолет дулкын озынлыгы (nm) гадәттә 254 / 300nm, һәм 30 минутка нурландыру җитә.Әйтергә кирәк, калдык PCR продуктларының пычрануын бетерү өчен UV сайлаганда, PCR продуктының озынлыгы һәм продукт эзлеклелегендә нигезләр бүленеше каралырга тиеш.УВ нурлары 500 фунттан артык озын фрагментлар өчен генә эффектив, һәм кыска фрагментларга аз тәэсир итә.

УВ нурлары вакытында PCR продуктындагы пиримидин нигезләре үлчәмнәр барлыкка китерәчәк.Бу үлчәмнәр киңәйтүне туктатырга мөмкин, ләкин ДНК чылбырындагы барлык пиримидиннар да үлчәмнәр барлыкка китерә алмыйлар, һәм УВ нурлары да үлчәмнәрне сындырырга мөмкин..Димер формалашу дәрәҗәсе UV дулкын озынлыгына, пиримидин димер төренә һәм димер мәйданына кушылган нуклеотидлар эзлеклелегенә бәйле.Шуңа күрә, PCR көчәйтелгән фрагментлар кечкенә булса, UNG анти-PCR продуктларын пычрату системасын кулланырга киңәш ителә.

3 ： еш кулланыла торган ДНК пычраткычлары

Аэрозоллар пипеталар өстәлгәндә җиңел барлыкка килә, моннан саклану авыр, һәм ул тиз урнашачак.Шуңа күрә, ДНК пычрануының таралуы өчен, махсус ДНК пычраткычларын еш куллану яхшы сайлау.

4 UN UNG пычрануга каршы системаны кулланыгыз

PCR продуктлары пычранганнан соң, сынау лабораториясе PCR продуктларын пычрату өчен UNG анти-PCR продуктларын пычрату системасын куллана ала.Гомуми лабораторияләрдә сез гади эксперименталь бүлекләр ясый аласыз, PCR продукт мәйданын бүтән өлкәләрдән аера аласыз, кайбер лаборатория кагыйдәләрен һәм кагыйдәләрен булдыра аласыз, һәм PCR продуктлары пычрануына юл куймас өчен тиешле тренинг үткәрә аласыз.

Тәкъдимнәр: акыллы PCR лабораториясен булдыру, яхшы PCR мохитен саклау, стандарт PCR эш процедураларын формалаштыру, һәм экспериментларның катгый эшлекле белемнәрен үстерү PCR экспериментларын пычратуны кисәтү яки киметү өчен ачкыч.