PCR реакциясенең күренекле үзенчәлеге - аның зур көчәйтү көче һәм бик югары сизгерлеге.PCR җитештерүчәнлеген һәм ачыклау эффективлыгын яхшырту өчен, без PCR көчәйтү сәләтен һәм ачыклау сизгерлеген яхшыртырга тиеш, ләкин баш авырту эксперимент процессында.Ялган позитивлар еш очрый, һәм бик аз күләмдә үрнәк кроссовкалар яки PCR продуктлары пычрануы экспериментта ялган позитивларга китерергә мөмкин.
PCR продуктының биш төре
PCR пычрануның күп сәбәпләре бар, аларны түбәндәге категорияләргә бүлеп була:
Specрнәкләр пычрануы, нигездә, үрнәк җыю өчен контейнерның пычрануы аркасында килеп чыга, яки үрнәк урнаштырылганнан соң, контейнердан иркен мөһерләнү аркасында агып чыга, яки үрнәк контейнерның тышкы ягына ябыштырыла, бу аркылы пычрануга китерә;Пычрату үрнәкләр арасында пычрануга китерә;кайбер микробиаль үрнәкләр, аеруча вируслар, аэрозоллар белән таралырга яки аэрозоллар ясарга мөмкин, нәтиҗәдә үзара пычрануга китерәләр.
Төп сәбәп - PCR реагентларын әзерләгәндә, мылтык, контейнер, икеләтә дистилляцияләнгән су һәм башка эремәләр PCR нуклеин кислотасы шаблоны белән пычранган.
Молекуляр биология лабораторияләрендә һәм клонланган плазмидларны уңай контроль буларак кулланган кайбер лабораторияләрдә клонланган плазмид белән агулану проблемасы да киң таралган.Чөнки берәмлек күләмендә клонлаштыру плазмидының эчтәлеге шактый зур, һәм чистарту процессында күбрәк кораллар һәм реагентлар кирәк, һәм тере күзәнәкләрдәге плазмид тере күзәнәкләрнең көчле үсүе һәм үрчү сәләте аркасында пычранырга мөмкин.
Күчерелгән продуктларның пычрануы PCR реакцияләрендә иң таралган пычрану проблемасы.PCR продуктының күчерелмә саны зур булганлыктан (гадәттә 1013 данә / мл), бу PCR ачыклау копия номерыннан күпкә югарырак, PCR продуктының пычрануы бик аз ялган позитивларга китерергә мөмкин.
Аэрозол пычрануы - PCR продуктларын пычратуның иң мөгаен формасы, һәм аны оныту да җиңел.Ул сыек өслек белән һава арасындагы сүрелү аркасында барлыкка килә.Гадәттә, аэрозол пычрануы капка ачылганда, үрнәк омтылганда яки реакция трубасы көчле селкенгәндә барлыкка килергә мөмкин.Хисаплар буенча, аэрозол кисәкчәсе 48000 данә булырга мөмкин, шуңа күрә аның аркасында булган пычрану аеруча игътибарга лаек проблема.
Аерым алганда, сынау лабораторияләре еш кына билгеле бер генны сынау өчен бер үк пар праймериз кулланалар.Вакыт узу белән лаборатория киңлегендә күп санлы PCR продуктлары пычраначак.Мондый пычрану килеп чыккач, аны кыска вакыт эчендә бетерү кыен.
Пычратуның беренче өч төре өчен без эффектив чаралар куллана алабыз, ләкин PCR продуктлары аркасында булган пычрануны кисәтү авыр, аеруча стандарт булмаган PCR лабораторияләре төзелешендә.PCR процессында, пипетка очлары сыеклыкны суырып сугкач, һәм PCR трубасы каплавы ачылгач, аэрозол барлыкка киләчәк.Аэрозол белән йөртелгән ДНК молекулалары (бер аэрозол дистәләрчә мең ДНК йөртә ала) бетерү авыр, чөнки алар һавада йөзәләр.PCR экспериментларының чираттагы туры кертелгәч, ялган позитивлар котылгысыз булачак.
Түбәндәге рәсемдә күрсәтелгәнчә, тискәре контроль шулай ук тиешле кызыксыну төркемен көчәйтте:
PCR пычрату һәм профилактикалауның бу санының беренче өлеше монда кертелгән.Киләсе чыгарылыш сезгә "PCR продуктларын пычратуны профилактикалау" икенче өлешен китерәчәк, шуңа күрә тыңлагыз!
Пост вакыты: 25-2017 июль
