Туры PCR - реакция, нуклеин кислотасы чыгармыйча көчәйтү өчен хайван яки үсемлек тукымаларын куллана.Күп яктан туры PCR гадәти PCR кебек эшли

Төп аерма - туры PCR кулланылган махсус буфер, үрнәк турыдан-туры PCR реакциясенә нуклеин кислотасы чыгармыйча бирелергә мөмкин, ләкин ферментларның толерантлыгы һәм туры PCR реакциясендә катнашкан буферның туры килүе өчен тиешле таләпләр бар.

Гомуми үрнәкләрдә PCR ингибиторы күбрәк яки аз булса да, туры PCR ферментлар һәм буферлар ярдәмендә ышанычлы көчәйтүгә ирешә ала.Традицион PCR реакциясе шаблон буларак югары сыйфатлы нуклеин кислотасын таләп итә, шаблонда протеиннар һәм башка пычраклар булса, PCR реакциясенең шома алгарышын тоткарлый ала.Туры PCR хәзерге вакытта молекуляр диагностика өлкәсендә иң популяр технологияләрнең берсе.

01 Туры PCR башта хайван һәм үсемлек өчен кулланылган

Турыдан-туры PCR куллану хайваннар һәм үсемлекләр өлкәсендә, мәсәлән, тычканның каны, тукымасы һәм чәчләре, мәче, тавык, куян, сарык, мөгезле эре терлек һ.б. үсемлек яфраклары һәм орлыклары һ.б.

Бу кырларның кайбер уртак үзенчәлекләре бар, ягъни максатлы ген эчтәлеге чагыштырмача зур һәм нуклеин кислотасын чыгару авыр, шуңа күрә туры PCR вакытны саклап кала алмый һәм нәтиҗәләргә аз тәэсир итә, чыгымнарны да саклый.

Патогенны ачыклау өчен кулланылган туры PCR - соңгы еллар, кайбер PCR реагент җитештерүчеләре инновация ясаганда бу юнәлештә күп көч куйдылар.Бигрәк тә бу COVID-19 эпидемиясендә базарда SARS-CoV-2 Нуклеин кислотасын ачыклау комплекты (Multiplex PCR Флуоресцент Тикшерү Метод) кебек күп продуктлар пәйда булды, алар SARS-CoV-2 нуклеин кислоталарын сыйфатлы ачыклау өчен Foregene тарафыннан тикшерелгән һәм эшләнгән.

Форген - туры ORF1ab, N, E, һәм ачыклау өчен туры PCR технологиясен кулланган компанияләрнең берсевариант наз нуклеин кислоталары кеше назофарингаль яки орофарингаль сваб үрнәкләрендә SARS-CoV-2 B.1.1.7 нәселе (Бөекбритания), B.1.351 нәселе (ZA), B.1.617 нәселе (IND) һәм P.1 нәселе (BR).

02  Туры PCR өчен кирәк булган реагентлар

Лизат үрнәге

Лизат үрнәген үзегез конфигурацияләргә яки сатып алырга мөмкин.Лизатның төрле маркаларының составындагы аерма лизинг сәләтен төрле итәчәк, аннары лизинг вакыты бераз башка булыр.Мәсәлән, хайван тукымасы үрнәкләрен әзерләү өчен 30 минут яки төнге лизис тәкъдим ителә, һәм вируслар өчен лизис эремәсе 3-10 минут арасында.

PCR мастер-микс

Аерым көчәйтү көчен арттыру һәм көчәйтү сәләтен арттыру өчен кайнар старт ДНК полимеразын кулланырга киңәш ителә.Туры PCR үзәге - бик толерант полимераз.

ДНК көчәйтүенә тәэсир итүче үрнәк компонентларны бетерү яки тыю

Ampleрнәк лизат белән эшкәртелгәннән соң, протеиннар, липидлар һәм башка күзәнәк калдыклары чыгарылачак, бу матдәләр PCR реакциясен тыячак.Шуңа күрә туры PCR бу факторларның йогынтысын киметү өчен тиешле бетерү яки ингибиторлар кушуны таләп итә.

03  Туры PCRның биш белем ноктасы

Беренчедән, туры PCR технологиясе - төрле биологик үрнәкләр өчен туры PCR технологиясе.Бу техник шартларда, нуклеин кислотасын аерырга һәм чыгарырга, тукымалар үрнәген турыдан-туры объект итеп кулланырга, һәм PCR реакциясен башкару өчен максатлы ген праймерларын өстәргә кирәк түгел.

Икенчедән, туры PCR технологиясе традицион ДНК шаблонын көчәйтү технологиясе генә түгел, ә PCR шаблонының кире транскрипциясен дә үз эченә ала.

Өченчедән, туры PCR технологиясе тукымалар үрнәкләрендә гадәти сыйфатлы PCR реакцияләрен турыдан-туры эшләп кенә калмый, шулай ук ​​Real-Time qPCR реакцияләрен дә үз эченә ала, бу реакция системасының көчле фонга каршы флуоресцент интерфейс мөмкинлеген һәм эндоген флуоресцент антагонистик сәләтне сүндерүне таләп итә.

Дүртенчедән, туры PCR технологиясенә юнәлтелгән үрнәкләр нуклеин кислотасы шаблоннарын чыгарырга гына тиеш, һәм PCR реакциясенә комачаулаган аксымнарны, полисахаридларны, тоз ионнарын һ.б. чыгармыйлар.Нуклеин кислотасы полимеразы һәм PCR Микс реакция системасында ферментларның активлыгын һәм катлаулы шартларда репликация төгәллеген тәэмин итү өчен искиткеч каршылык һәм җайлашу таләп итә.

Бишенчедән, нуклеин кислотасын баетмыйча, туры PCR технологиясенә юнәлтелгән тукымалар үрнәге һәм шаблон күләме бик аз, бу реакция системасының бик югары сизгерлек һәм көчәйтү эффективлыгын таләп итә.