PCR реакцияләрен эшләгәндә һәркем һәрвакыт андый яки андый проблемалар белән очрашачак дип ышанам, ләкин аларның күбесен ике төп проблемага бүлеп була:

Ген шаблонын бик аз көчәйтү (көчәйтү);
Максатлы булмаган ген көчәйтү.
Кушымчалар куллану - бу проблемаларны чишү өчен уртак стратегияләрнең берсе.Гадәттә өстәмәләрнең роле ике аспектка ия:
икенчел структурагеннар (икенчел структура);
Конкрет булмаган примингны киметү.
Бүген редактор сезгә кыскача PCR реакцияләрендәге гомуми өстәмәләр һәм аларның функцияләре белән таныштырачак.
Икенчел структураны киметүче өстәмәләр
сульфоксид(DMSO)
ген үрнәкләреюгары GC эчтәлеге белән.Ләкин, DMSO шулай ук ​​Так полимераз активлыгын киметә.Шуңа күрә, һәркем шаблонга керү мөмкинлеген һәм полимераз активлыгын тигезләргә тиеш.Редактор сезнең экспериментка туры килгән концентрацияне табу өчен, DSMOның төрле концентрацияләрен сынап карарга тәкъдим итә, мәсәлән, 2% дан 10% га кадәр.
Ион булмаган югычлар
Ион булмаган югычлар, мәсәлән, 0,1-1% Тритон X-100, 20 яки NP-40 арасында, гадәттә ДНКның икенчел структурасын киметәләр.Бу шаблон генының көчәйтү көчен арттыра алса да, специаль булмаган көчәйтү проблемасына китерәчәк.Шулай итеп, бу өстәмәләр аз продуктлы PCR реакцияләре өчен чүп-чарсыз яхшы эшли, ләкин чагыштырмача пычрак PRC реакцияләре өчен алай ук ​​яхшы түгел.Ион булмаган югычларның тагын бер өстенлеге - SDS пычрануны киметү.Гадәттә, ДНК чыгару процессында, SDS PCR адымына китереләчәк, бу полимераз эшчәнлеген бик нык тыя.Шуңа күрә реакциягә 0,5% Tween-20 яки Tween-40 кушылу SDSның тискәре йогынтысын нейтральләштерә ала.
Бетаин_
Бетаин ДНК көчәйтүне икенчел структура формалаштыруны яхшырта ала һәм коммерция PCR комплектларына гадәттә "сер" булып тора.Әгәр дә сез бетаин кулланырга телисез икән, сез бетаин яки бетаин моно-гидратын (Бетаин яки Бетаин моно-гидраты) куярга тиеш, ләкин бетаин гидрохлориды түгел (Бетаин HCl), соңгы концентрациягә 1-1,7М көйләгез.Бетаин шулай ук ​​үзенчәлекне яхшыртырга булыша ала, чөнки ул ДНК эрү / ДНК денатурациясенең төп пар композициясенә бәйләнешне бетерә.
Конкрет булмаган примингны киметү өчен өстәмәләр
Формамид
Формамид - еш кулланыла торган органик PCR өстәмәсе.Ул ДНКдагы зур трюк һәм кечкенә трюк белән берләшә ала, шуның белән мастер ДНКның икеләтә геликсының тотрыклылыгын киметә һәм ДНКның эрү температурасын төшерә ала.PCR экспериментларында кулланылган формамид концентрациясе гадәттә 1% -5% тәшкил итә.
Тетраметиламмиак хлорид( TMAC)
Тетраметиламмоний хлорид гибридизациянең үзенчәлеген (гибридизация үзенчәлеге) арттырырга һәм ДНКның эрү температурасын арттырырга мөмкин.Шулай итеп, TMAC специаль булмаган примингны бетерә ала һәм ДНК һәм РНКның дөрес булмаган бәйләнешен киметә ала.Әгәр куллансагызбозылган праймеризPCR реакциясендә, гадәттә 15-100мМ концентрациясендә кулланыла торган TMAC өстәргә онытмагыз.
Башка киң таралган өстәмәләр
Aboveгарыда телгә алынган ике категорияле өстәмәләргә өстәп, PCR реакцияләрендә бик күп уртак өстәмәләр бар, аларның төрле функцияләре булса да, алар бик мөһим.
Магний ионы
Магний ионы - полимеразның алыштыргысыз кофакторы (кофакторы), ягъни магний ионы булмаса, полимераз актив түгел.Ләкин, артык магний ионнары полимеразның эффективлыгына да тәэсир итә ала.Eachәр PCR реакциясендә магний ионнары концентрациясе төрлечә булачак.Челтинг агентлары (EDTA яки цитрат кебек), dNTP һәм протеиннарның концентрациясе барысы да магний ионнары концентрациясенә тәэсир итә.Шулай итеп, сезнең PCR экспериментыгызда проблемалар булса, сез төрле магний ион концентрацияләрен үзгәртергә тырыша аласыз, мәсәлән, 1,0-1,0 мм, арасы 0,5-1 мм.
Әйтергә кирәк, күп туңдыру цикллары магний хлорид эремәсенең концентрация катламына китерергә мөмкин.Шуңа күрә сез аны кулланганчы тулысынча эретергә тиеш, һәм аны кулланганчы яхшылап кушарга.
Албумин сарысы(Бовин альбумин, BSA)
Молекуляр химия экспериментларында, сары сары альбомин бик киң таралган өстәмә, аеруча ферментларның ашкайнатуны чикләүдә һәм PCR экспериментларында.PCR реакцияләрендә, BSA фенолик кушылмалар кебек пычраткыч матдәләрне киметүдә ярдәм итә.Бу шулай ук ​​реакторларның сынау трубасы стенасына ябышуын киметә ала диләр.PCR реакциясендә, гадәттә, кушылган BSA концентрациясе 0,8 мг / млга җитә ала.
 
Бәйләнешле продуктлар:
PCR Герое(буяу белән)
PCR Герое