Авторлар: Ван Сяоян, Чжао Эрю

Бүлек: iaзячжоу хастаханәсе, Донгфанг хастаханәсе Тонгжи университетына караган

Хәзерге вакытта, сулыш алу патоген нуклеин кислотасын ачыклау өчен төп үрнәк төре - тамак селкәсе.Гадәттә кулланыла торган үрнәкне саклау чишелешләренең күп төрләре бар, аларның барысын да суыту яки туңдыру кирәк;Collectionыю һәм ташу процессында түбән температураның бөтен процессын контрольдә тоту кыен, һәм үрнәк сынау алдыннан сыйфат контролен тәэмин итү кыен.^[1-2].

RNase (RNase) - эндонуклаз, ул РНКны гидролизлый, нигездә нуклеотидлар арасындагы фосфодистер бәйләнешләрен өзә.RNase молекуласы бик тотрыклы, структурада диффид бәйләнешләре бар, һәм аның эшчәнлеге дивалент катионнар булуын таләп итми, шуңа күрә RNase җиңел денатурацияләнми, һәм югары температура яки денатурантлар кулланганнан соң да үзгәрү җиңел.RNases эндоген һәм экзогенга бүленә.Эндоген RNases күзәнәкләр ярылган вакытта бер үк вакытта чыгарылырга мөмкин.Шуңа күрә, эндоген RNases ролен бетерү - РНК чыгару процессында бик мөһим адым.Экзоген RNases киң таралган.РНазлар һавада, кеше тиресендә, чәчләрдә һәм тозакларда бар, алар РНКның җиңел деградациясенең мөһим сәбәпләре^[3].

Мәгълүмат соравы

CANS-CL02-A009 "Молекуляр диагностика өлкәсендә медицина лабораториясенең сыйфатын һәм компетенцияне аккредитацияләү принципларын куллану" техник таләпләрдә су сыйфаты стандартларын гариза нигезендә формалаштырырга тәкъдим итә;Бер тапкыр кулланыла торган һава үткәрми торган контейнерлар:

RNase / Классификация

(1) RNase A.

Рибонуклаз A (RNase A), ашказаны асты бизеннән алынган, эндорибонуклаз, ул РНКдагы пиримидин калдыкларының 3 ′ очына махсус һөҗүм итә ала, цитозин яки урасилны күрше нуклеотидлар белән кисә.Фосфодистер бәйләнеше, реакциянең соңгы продукты - 3 ′ пиримидин нуклеотид һәм ахырда 3 ′ пиримидин нуклеотиды булган олигонуклеотид.

(2) RN1 T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae-дан алынган, ул махсус 3-терминаллы гуан фосфатында эшли, һәм ярылу урыны 3 ′ гуан фосфаты белән янәшә нуклеотидларның 5 ′ гидроксил арасында.Реакциянең соңгы продукты - 3′гуанил кислотасы һәм ахырда 3′гуанил кислотасы булган олигонуклеотид фрагментлары.

(3) RNase H.

Рибонуклаз H (RNase H) бозау тимус тукымасыннан беренче тапкыр ачылган, һәм аның кодлау гены Эшеричия колиына клонланган.Бу махсус ДНКны киметә ала: РНК гибрид дуплексларында РНК полосалары, нәтиҗәдә олигонуклеотидлар һәм 3′-OH һәм 5′-монофосфат очлары булган мононуклеотидлар, ул бер яки ике катлы ДНК яки РНКны киметә алмый.

RNase

Функция һәм куллану

Рибонуклаз рибонуклеин кислотасының (РНК) деградациясен катализацияли һәм ясалма рәвештә синтезланырга мөмкин.Дару мае травма һәм буын авыртуларын дәвалау өчен кулланыла.Хәбәрләргә караганда, рибонуклаз күзәнәкләр алмашын үзгәртә ала, вирус синтезын тыя, грипп вирусының витрода таралуын һәм тавык яралгыларында вакцина һәм герпес вирусының барлыкка килүен тыя ала.Эпидемик энцефалитны дәвалау өчен файдалы булган рибонуклазның көн саен күзәнәк инъекциясен клиник куллану, рибонуклаз рибонуклеин кислотасының (РНК) деградациясен катализацияли ала, һәм хәзер ясалма синтезланырга мөмкин.Дару мае травма һәм буын авыртуларын дәвалау өчен кулланыла.Хәбәрләргә караганда, рибонуклаз күзәнәкләр алмашын үзгәртә ала, вирус синтезын тыя, грипп вирусының витрода таралуын һәм тавык яралгыларында вакцина һәм герпес вирусының барлыкка килүен тыя ала.Эпидемик энцефалитны дәвалау өчен рибонуклазны көн саен 180 мг инъекциядән клиник куллану файдалы.

RNase

Ингибитор төшенчәсе

RNase ингибитор берәмлегенең төшенчәсе: 5ng RNase A эшчәнлегенең 50% тыю өчен кирәк булган фермент күләме - бер берәмлек.

RNase ингибиторлары ничек эшли

Гуанидин изотиокянаты:

Гуанидин изотиокянат - C2H6N4S молекуляр формуласы белән органик кушылма.Нигездә биологик медицинада, химик реагентларда һ.б. кулланыла. Гуанидин изотиокянаты - протеин лизинг агенты, һәм ул еш молекуляр диагностик реагентларда лизис эремәсенең төп компоненты буларак кулланыла.Ул тукыманы ябыштыра, күзәнәк структурасын җимерә һәм нуклеин кислотасын нуклеопротеиннан аера ала, һәм RNase өчен көчле денатурациягә ия.Бу хәзерге вакытта иң эффектив RNase ингибиторы.

TRIzol - тулы РНКны чыгару реагенты, ул күзәнәкләрдән яки тукымалардан тулы РНКны чыгара ала.Анда фенол һәм гуанидин изотиокянат кебек матдәләр бар, алар күзәнәкләрне тиз боза һәм күзәнәкләр чыгарган нуклеазларны тыя ала.

(Ләкин, гуанидин изотиокянат лаборатория тикшерүчеләре сәламәтлеге өчен куркыныч.)

Р.Насин:

Кислота гликопротеин тычкан бавырыннан яки кеше бластодермыннан алынган.Рнасин - RNase-ның конкурент булмаган ингибиторы, ул аларны активлаштыру өчен төрле RNases белән бәйли ала.

(Төгәлрәк мәгълүмат: https: //www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hтемпература:

Temperatureгары температура шулай ук ​​протеин денатурациясенең киң таралган чарасы.

Дитилпирокарбонат (DEPC):

DEPC - көчле, ләкин тулы булмаган RNase ингибиторы, ул RNase актив төркеменең аминокислота имидазол боҗрасы белән кушылып, протеиннарны аера ала.

Ванадил рибонуклеозид комплексы:

Ванадий оксиды ионнары һәм нуклеозидлар формалашкан комплекс, алар RNase белән күчү матдәләре формасында бәйләнгән, алар RNase эшчәнлеген тулысынча тыя ала.

бүтән:

SDS, карбамид, диатомацион җир һ.б. шулай ук ​​RNaseга билгеле бер ингибитор эффект бирә.

Экспертиза

Ли ujжи баш техник

Тонгжи университеты карамагындагы Донгфанг хастаханәсе, iaзячжоу хастаханәсе лаборатория бүлеге директоры

Экзоген RNase биодеградациясен булдырмас өчен, маскалар, перчаткалар һәм калфаклар РНКны чыгару процессында еш киенергә һәм алыштырылырга тиеш.Барлык пыяла савытлар да 200 ° C температурада 2 сәгатьтән артык пешерергә тиеш.Пластик кебек пешерү өчен кулланылган материалларны DEPC суы белән эшкәртергә, аннары дистиллы су белән юарга кирәк.РНКны чыгару, саклау һәм идентификацияләү өчен кулланылган реагентлар яки җайланмалар РНКга багышланырга тиеш, һәм бәйсез РНК операция өлкәсе булдырылырга тиеш.

сылтамалар:

[1] Смит-Воган ХК, Бинкс М., Бейсбарт Дж, һ.б.Назофаринкстагы бактерияләр һәм вируслар Австралия җирле балаларында кискен түбән сулыш инфекцияләре башланганчы ук [J].Eur J Clin микробиол инфекцион диск, 2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Кытай профилактик медицина ассоциациясенең хастаханә инфекциясен контрольдә тоту бүлеге.Клиник микробиаль үрнәкләрне җыю һәм тикшерү өчен күрсәтмәләр [J].Кытай хастаханәсе инфекциясе журналы, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Клиник тест Ун мең ни өчен молекуляр биология тесты күләме"