Минем күз алдымда ачыклау технологиясе тарихында берничә революцион уйлап табу - антиген-антитела принцибы нигезендә PCR технологиясе һәм эзлекле технологияләр нигезендә иммунолабеллау технологиясе.Бүген без PCR технологиясе турында сөйләшәчәкбез.PCR технологиясе эволюциясе буенча кешеләр PCR технологиясен гадәттә өч буынга бүлеп куялар: гади PCR технологиясе, реаль вакыттагы флуоресцент санлы PCR технологиясе һәм санлы PCR технологиясе.
Cоммон PCR техникасы
КАРЫ МУЛЛИС (1944.12.28-2019.8.7)
Кэри Маллис 1983-нче елда полимераз чылбыр реакциясен уйлап тапты (полимераз чылбыр реакциясе, PCR). Иптәш кызын йөрткәндә кинәт илһам ялкыны һәм PCR принцибы турында уйлады (машина йөртү өстенлекләре турында).Кэри Маллис 1993-нче елда химия буенча Нобель премиясенә лаек булды. Нью-Йорк Таймс болай диде: "Бик оригиналь һәм әһәмиятле, биологияне PCR алдыннан һәм PCRдан соңгы чорларга бүлеп диярлек.
PCR принцибы: ДНК полимеразының катализы астында, ана полосасы ДНК шаблон буларак кулланыла, һәм махсус праймер киңәйтүнең башлангыч ноктасы буларак кулланыла, һәм кыз полосасы ДНК ана шаблоны ДНКны тулыландыручы витрода денатурация, аннальинг, киңәйтү һәм башка адымнар аша күчерелә.Бу витродагы ДНК синтезын көчәйтү технологиясе, ул витродагы теләсә нинди максатлы ДНКны тиз һәм махсус көчәйтә ала.
Гади PCR өстенлекләре
1.Классик ысул, тулы халыкара һәм эчке стандартлар
2.Инструмент реагентларының түбән бәясе
3.PCR продуктларын башка молекуляр биология экспериментлары өчен кайтарырга мөмкин
Foregene PCR машинасы тәкъдим ителә: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Бәйләнешле продуктлар: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Гади PCR җитешсезлекләре
1.пычрату җиңел
2.авыр операция
3.сыйфатлы анализ гына
4.Уртача сизгерлек
5.Конкрет булмаган көчәйтү бар, һәм специфик булмаган полоса максатчан тасма белән бер үк булганда, аны аерып булмый.
Cапиллари электрофорезга нигезләнгән PCR
Гади PCR җитешсезлекләренә җавап итеп, кайбер җитештерүчеләр капиллярлы электрофорез принцибы нигезендә инструментлар керттеләр.Электрофорез адымы капиллярда PCR көчәйтүдән соң.Сәнгатьчәнлек югарырак, һәм берничә нигезнең аермасын аерып була, көчәйтү MAERKER белән исәпләнә ала.продукт эчтәлеге.Кимчелек - PCR продуктын әле ачарга һәм коралга салырга кирәк, һәм пычрану куркынычы зур.
CапилларEлектофорез
2. Реаль вакыт флуоресцент санлы PCR (Санлы Реаль Вакыт PCR, qPCR) технологиясеФлуоресцент санлы PCR, шулай ук Real-Time PCR дип атала, PE (Перкин Элмер) тарафыннан 1995-нче елда эшләнгән яңа нуклеин кислотасы санлы технология. Флюоресцент санлы PCR үсеш тарихы - ABI, Roche, һәм Bio-Rad кебек гигантларның җан уята торган көрәш тарихы.Әгәр дә сез кызыксынсагыз, аны тикшерә аласыз.Бу техника хәзерге вакытта иң җитлеккән һәм киң кулланылган ярым санлы PCR техникасы.
Тәкъдим ителгән qPCR машинасы: https: //www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Флюоресцент буяу ысулы (SYBR Green I):SYBR Green I - санлы PCR өчен иң еш кулланыла торган ДНК бәйләүче буяу, ул махсус булмаган ике катлы ДНК белән бәйләнә.Ирекле хәлдә, SYBR Green зәгыйфь флюоресенция чыгара, ләкин ике катлы ДНК белән бәйләнгәндә, аның флюоресенциясе 1000 тапкыр арта.Шуңа күрә, реакциядән чыгарылган гомуми флуоресцент сигнал ике катлы ДНК күләменә пропорциональ һәм көчәйтелгән продукт арту белән артачак.Буяу махсус ике катлы ДНК белән бәйләнгәнгә, ялган уңай нәтиҗәләр барлыкка килергә мөмкин.
Бәйләнешле продуктлар: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Флуоресцент тикшерү ысулы (Такман технологиясе): вакытындаPCR көчәйтү, пар праймер белән бер үк вакытта махсус флуоресцент зонд өстәлә.Зонд - сызыклы олигонуклеотид, флуоресцент хәбәрче төркеме һәм ике очында да флюоресцент сүндергеч төркеме бар.Зонд тикшерелмәгәндә, хәбәрче төркеме чыгарган флуоресцент сигнал сүндергеч төркеме тарафыннан үзләштерелә, һәм ачыклау Флюоресцент сигнал юк;PCR көчәйтү вакытында (киңәйтү этабында), Так ферментының 5'-3 'Дисер активлыгы зонаны сеңдерәчәк һәм деградацияләячәк, шулай итеп хәбәрче флуоресцент төркеме һәм сүндергеч флуоресцент төркеме аерыла, шулай итеп флуоресцент мониторинг системасы кабул ителә, ягъни ДНК чылбыры көчәйтелгәндә, флюоресцент молекула барлыкка килә, тулы синхронизациянең флюоресцент молекуласы барлыкка килә.Такман тикшерү ысулы - клиник ачыклауда иң еш кулланыла торган ачыклау ысулы.
Бәйләнешле продуктлар: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
QPCR өстенлекләре
1.Метод җитлеккән, ярдәмче җиһазлар һәм реагентлар тулы
2.Реагентларның уртача бәясе
3.куллану җиңел
4.Detгары ачыклау сизгерлеге һәм үзенчәлеге
QPCR җитешсезлекләре
Максатлы генның мутациясе сагынылган ачыклауга китерә.
Аз концентрацияле шаблонны ачыклау нәтиҗәсен билгеләргә ярамый.
Санны ачыклау өчен стандарт сызыкны кулланганда зур хата бар.
3. Санлы PCR (санлы PCR, dPCR) технологиясе
Санлы PCR - нуклеин кислотасы молекулаларын абсолют санлаштыру ысулы.QPCR белән чагыштырганда, санлы PCR турыдан-туры ДНК / РНК молекулаларын укый ала, бу башлангыч үрнәктә нуклеин кислотасы молекулаларының абсолют күләме.1999 елда Берт Вогельштейн һәм Кеннет В. Кин-злер рәсми рәвештә dPCR төшенчәсен тәкъдим иттеләр.
2006-нчы елда Fluidigm беренче булып коммерция чипка нигезләнгән dPCR инструменты җитештерде.2009 елда Life Technologies OpenArray һәм QuantStudio 12K Flex dPCR системаларын эшләтеп җибәрде.2013 елда, Life Technologies QuantStudio 3DdPCR системасын эшләтеп җибәрде, ул югары тыгызлыктагы наноскаль микрофлуидик чип технологиясен куллана, үрнәкләрне 20 000 аерым күзәнәкләргә тигез тарату өчен.реакциядә.
2011-нче елда Bio-Rad тамчыга нигезләнгән QX100 dPCR инструментын эшләтеп җибәрде, ул нефть-нефть технологиясен кулланып, үрнәкне 20 000 тамчы-майга тигез бүлү өчен куллана, һәм тамчыларны анализлау өчен тамчы анализатор куллана.2012 елда, RainDance югары басымлы газ белән идарә итүче RainDrop dPCR коралын эшләтеп җибәрде, һәр стандарт реакция системасын реакция эмульсиясенә бүлү өчен, 1 миллионнан алып 10 миллионга кадәр пиколитер дәрәҗәсендәге микро-тамчылар.
Әлегә санлы PCR ике төп фракция формалаштырды, чип тибы һәм тамчы тибы.Нинди санлы PCR булуына карамастан, аның төп принциплары эретүне, соңгы нокта PCR һәм Poisson таратуны чикли.Нуклеин кислотасы шаблоннарын үз эченә алган стандарт PCR реакция системасы дистәләрчә мең PCR реакцияләренә тигез бүленә, алар чипларга яки микродроплетларга таратыла, шулай итеп һәр реакция шаблон молекуласын мөмкин кадәр үз эченә ала, һәм бер молекулалы шаблон PCR реакциясе башкарыла.Флюоресенцияне укып, сигналның булуы яки булмавы санала, һәм абсолют санлаштыру статистик Poisson бүленеше калибрланганнан соң башкарыла.
Түбәндә мин кулланган берничә санлы PCR платформаларының характеристикалары бар:
1. Bio-Rad QX200 тамчы санлы PCR Bio-RadQX200 - бик классик санлы PCR платформасы, төп ачыклау процессы: 20,000 үрнәк тамчы генератор белән ясала Су-майлы микро-тамчылар гади PCR машинасында көчәйтелә, һәм ниһаять, һәр микро-тамчы флюоресенция сигналын микро-тамчы укучы укый.Операция катлаулырак, пычрану куркынычы уртача.
Xinyi TD1 микро-тамчы санлы PCRXinyi TD1 - эчке санлы PCR платформасы, төп ачыклау процессы: тамчы генератор аша 30,000-50,000 суда нефть тамчылары булдыру, уртак PCR коралында көчәйтү, һәм ниһаять, тамчы укучы һәр тамчының флюоресцент сигналын укый.Тамчы ясау да, бу платформада уку да аз пычрану куркынычы булган махсус чипта башкарыла.
STILLA Naica микро-тамчы чип санлы PCRSTILLA Naica - чагыштырмача яңа санлы PCR платформасы.Ачыклауның төп процессы: чипка реакция чишелешен өстәү, чипны микро-тамчы буынга һәм көчәйтү системасына кую, һәм 30,000 микро тамчы ясау.Чипка таралыгыз, һәм PCR көчәйтү чипта тәмамланды.Аннары көчәйтелгән чип микро-тамчы уку анализ системасына күчерелә, һәм флуоресцент сигнал фотога төшеп укыла.Бөтен процесс ябык чипта булганлыктан, пычрану куркынычы түбән.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D чип санлы PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D - тагын бер классик чипка нигезләнгән санлы PCR платформасы.Аның төп ачыклау процессы: реакция эремәсен таратучыга өстәгез, һәм реакция эремәсен чипка тигез итеп таратыгыз, 20 000 микроэлемент белән таратучы аша.көчәйтү өчен чипны PCR машинасына куегыз, һәм ниһаять, чипны укучыга куегыз һәм флуоресцент сигналны укыр өчен фотога төшегез.Операция чагыштырмача катлаулы, һәм бөтен процесс ябык чипта башкарыла, пычрану куркынычы түбән.
5. JN MEDSYS Ачыклык чип санлы PCR
JN MEDSYS Ачыклык - чагыштырмача яңа чип тибындагы санлы PCR платформасы.Аның төп ачыклау процессы: реакция чишелешен абитуриентка өстәү, һәм реакция чишелешен PCR трубасына урнаштырылган 10,000 PCR трубасына тигез итеп тарату.Микропороз чипта реакция эремәсе капкага капиллярлы хәрәкәт аша керә, һәм чип белән PCR трубасы көчәйтү өчен PCR машинасына куела, һәм ниһаять, фотога төшеп флуоресцент сигналны уку өчен чип укучыга куела.Операция катлаулырак.Пычрату куркынычы түбән.
Digitalәр санлы PCR платформасының параметрлары түбәндәгечә ясала:
Санлы PCR платформасының бәяләү күрсәткечләре: бүленгән берәмлекләр саны, флуоресцент каналлар саны, эшнең катлаулылыгы һәм пычрану куркынычы.Ләкин иң мөһиме - ачыклау төгәллеге.Санлы PCR платформаларын бәяләүнең бер ысулы - бер-берсен тикшерү өчен берничә санлы PCR платформаларын куллану, икенче ысул - төгәл кыйммәтле стандарт матдәләрне куллану.
DPCR өстенлекләре
1.Абсолют санга ирешү
2.Higherгары сизгерлек һәм үзенчәлек
3.Түбән күчермә үрнәкләрен ачыклый ала
DPCR җитешсезлекләре1. Кымбат җиһазлар һәм реагентлар 2. Катлаулы эш һәм озак ачыклау вакыты 3. Тарны ачыклау диапазоны
Хәзерге вакытта PCR технологиясенең өч буынының үз өстенлекләре һәм кимчелекләре бар, һәм аларның һәрберсенең үз куллану өлкәләре бар, һәм бу бер буынның икенчесен алыштырган мөнәсәбәт түгел.Технологиянең өзлексез алга китүе PCR технологиясенә яңа җанлылык кертте, бер-бер артлы куллану юнәлешен ачарга мөмкинлек бирде, нуклеин кислотасын ачыклау уңайлырак һәм төгәлрәк булды.
Доктор uanан сезне сынап карарга алып бара
Тәкъдим ителгән продуктлар:
Пост вакыты: 18-2022 ноябрь
